黄芪注射液对缺血再灌注大鼠脑组织保护作用研究

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1、黄罠注射液对缺血再灌注大鼠脑组织保护作用研究于淼高维娟河北省承德医学院附属医院河北承德067000【摘要】目的：应用四血管法建立全脑缺血再灌注损伤模型，观察脑缺血再灌注7天海马CA1区神经元形态学和超微结构变化，存活细胞数和细胞凋亡率的变化。并应用黄罠注射液进行干预，对上述指标的变化情况进行比较，探讨黄罠注射液减轻脑缺血再灌注损伤的作用机制，为黄罠注射液的临床应用提供理论基础。【关键词】黄罠注射液；脑缺血再灌注；海马CA1区；细胞凋亡【中图分类号1R285.5【文献标识码］B【文章编号J1764-8999(2015)7-0616-

2、01脑血管疾病是目前人类死亡和残疾的主要原因之一，该病的发牛主要与脑血流的减少和缺血性脑损伤有关。研究脑缺血后神经元损伤的发牛机制以及可能的干预因素，寻找有效的脑保护药物，最大限度地减少神经细胞的急性和迟发性死亡，保护脑功能，仍是当前研究的热点和难点。中药黄罠，应用历史悠久，具有抗炎、抗病毒、抗衰老、调节免疫、抗肿瘤等作用［1］,并有实验表明对缺血后迟发性神经元损伤有保护作用［2］,受到医家的青睞。鉴于中药黄罠对脑血管病多靶点治疗的作用特点，黄罠对缺血性脑损伤影响的研究也成为当前医学领域研究的热点。木实验的研究目的就是探讨黄罠注射

3、液减轻脑缺血再灌注损伤的作用机制，为黄罠注射液的临床应用提供理论基础。1资料和方法1.1方法：木实验中我们应用成木低，种系纯合性好，与人类脑血管解剖特性相似的SD大鼠为实验动物，采用改良的Pulsinelli四血管法［3］,建立全脑缺血15分钟再灌注7天损伤模型，并观察黄罠注射液的作用。此法的优点是，检验缺血是否成功的指标明确，能在清醒的动物上复制。我们将48只SD大鼠随机分为假手术组，缺血再灌注模型组，尼莫地平组，黄茂注射液治疗组。并选择应用HE染色在光学显微镜下观察海马CA1区神经元形态变化及存活神经元计数；应用电镜观察海马C

4、A1区超微结构变化；应用流式细胞仪检测海马组织神经元凋亡率。1.2统计学方法：实验数据均用均数±标准差(±s)表示,各组之间均数的比较采用单因素方差分析，应用SPSS统计软件。P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1海马CA1区神经细胞形态学变化：假手术组：海马CA1区神经元外形规则，3~4层，细胞层排列整齐而致密，核大而圆，透明，有2~2个明显核仁，核膜清起。模型组：神经元排列紊乱而疏松，外形皱缩，部分细胞脫失，核固缩深染，胞浆空化，核溶解，核膜境界不清；神经元计数显著低于假手术组(P<

5、;0.01)。尼莫地平组和黄茂注射液治疗组相似：大部分神经元保持正常形态，细胞排列基本规则，少量细胞轻度脫失，部分胞染变深，残存的神经元大部分呈可逆性缺血性改变;神经元计数显著高于模型组(P<0.01)o2.2海马CA1区神经细胞超微结构变化：假手术组：7天后神经元细胞核呈卵圆形，两层膜结构清晰光滑，核周间隙均匀，核内染色质均匀分布，胞浆内细胞器丰富，结构完整，可见高尔基体分布，结构呈扁平囊泡平行排列，线粒体呈圆形、椭圆形，内悄清晰可见，基质均匀，粗面内质网平行排列或散在分布，大量糖原颗粒存在于胞浆中。模型组：细胞核膜结构模

6、糊，线粒体空泡化明显，H较多较重，高尔基体不规则。尼莫地平组和黄茂注射液治疗组相似，与模型组相比，海马病变较轻，胞浆内细胞器丰富，细胞器结构较完整，部分细胞器结构变性。2.3海马神经元凋亡率：与假手术组相比，模型组神经元凋亡率明显升高(P<0.01)；与模型组相比，黄茂注射液组和尼莫地平组神经元凋亡率显著降低(P<0.01)；与尼莫地平组相比，黄茂注射液组神经元凋亡率无明显变化(P>0.05)o3讨论脑血管病是临床常见多发性疾病，其致残率及致死率极高，是人类当前三大死亡原因之一，而缺血性脑血管病约占全部脑血管病的

7、7%左右［4］。缺血性脑血管病尤其是脑缺血再灌注损伤对人类健康的危害极大。脑缺血再灌注损伤的机制十分复杂，早期一直认为脑血供减少，能量衰竭发挥主要作用。但进一步的研究发现，缺血缺氧引起的中枢神经系统能量衰竭为触发点，造成一系列缺血损伤的级联反应，在缺血再灌注损伤中发挥垂要作用。包括自由基引起的脂质过氧化损伤、神经递质的改变、兴奋性氨基酸毒性、钙超载及炎症介质的作用等。全脑缺血在临床上常见于休克、窒息、心肌梗死、严重的心律失常、呼吸衰竭等造成的脑部低灌流状态，缺血范围广泛，而脑组织对氧和葡萄糖的储存几乎为零，缺血后数分钟即可出现神经

8、元的坏死，脑损伤的严重程度与缺血缺氧时间呈正相关，因此迅速恢复脑的血液供应，终止缺血状态及缺血所造成的脑损伤，有极其重要的临床意义。然而人量的实验证实，脑缺血缺氧再灌注引起炎症性反应及氧自由基生物膜损害导致部分损伤细胞继发性死亡［5,6］,即存在再