大肠菌群放法确认材料

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1、饮用天然矿泉水中大肠菌群的测定多管发酵法测定方法验证报告（GB/T8538-2008饮用天然矿泉水检验法）1•目的通过能力确认，确认实验室在人、机、料、法、环等方面是否都达到标准要求，实验室是否具备开展用多管发酵法测定天然饮用矿泉水及水源水中的大肠菌群的检测能力。2.适用范围本标准规定了用多管发酵法测定天然饮用矿泉水及水源水中的大肠菌群。本标准适用于天然饮用矿泉水及水源水中的大肠菌群的测定。3.职责3.1检测人员负责按操作规程操作，确保测量过程正常进行，消除各种可能影响试验结果的意外因素。3.2复核人员负责检查原始

2、记录。3.3技术负责人负责审核检测结果。4.测试方法4.1术语和定义大肠菌群：需氧及兼性厌氧、在37°C能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。4.2.培养基与试剂乳糖胆盐发酵培养液：成分：A蛋白月东20gB乳糖lO.OgC猪胆盐5.OgD漂甲酚紫溶液（4g/L）2.5mLE蒸馅水lOOOmL制法：将蛋白月东、胆盐及乳糖溶于蒸馅水中，调pH到7.4,加入漂甲酚紫溶液，混匀，分装到带有倒管的试管中，每管10mLo6&95kPa（115°C,101b）高压灭菌20mino双料乳糖胆盐发酵培养液：将上述单料乳糖胆盐发酵

3、培养液中A、B、C、D数量均加倍,蒸馅水用量不变。亮绿乳糖胆盐培养液（BGB）成分蛋白月东牛胆盐蒸馅水10.OgB乳糖10.Og2.OgD亮绿0.0113glOOOmL制法：除亮绿外，将其他成分溶于蒸馅水中，调pH到7.2•加入亮绿，混匀,分装到装有小倒管的试管中，每管10mL,115°C灭菌20mino2.3检验步骤4.3.1矿泉水水源水检测：吸取10mL水样接种到盛有10mL双料乳糖胆盐发酵培养液中，共接种5份。吸取ImL水样接种到盛有10mL单料乳糖胆盐发酵培养液中,共接种5份。另吸取ImL水样接种到9mL灭

4、菌生理盐水中，混匀，用5mL灭菌吸管吸取5mL稀释液，分别加到5支盛有10mL单料乳糖胆盐发酵培养液中，每管lmL(即0.ImL水样)。(根据含菌量的多少，水样接种量可调整为ImL,0.ImL,0.OlmL或lOOmL,10mL,lmLo轻摇试管，使液体充分混合，置36°C±1°C培养箱内培养24h。观察每管是否产气，若有气体产生该管为推测性检验阳性。如不产气则为大肠菌群阴性。自推测性检验阳性管中取一接种环培养液，接种到亮绿乳糖胆盐培养液(BGB)管中，置于36°C±1°C培养箱中培养48小时。观察BGB管中的产气

5、情况，如有气体产生，就可以确定为“大肠菌群阳性”；如无气体产生则为“大肠菌群阴性”。记下BGB管里的产气的阳性管数，查表可得出水样中大肠菌群的MPN值。4.3.2直接饮用的矿泉水用10mL的灭菌吸管向5支盛有10mL双料乳糖胆盐发酵培养液的试管中，每管接种10mL水样。置于36°C±1°C培养箱中培养24h,观察每支管的产气情况,如有气体产生，则认为推测性检验阳性。自推测性检验阳性管中取一接种环培养液，接种到亮绿乳糖胆盐培养液(BGB)管中，置于36°C±1°C培养箱中培养48小时。观察BGB管中的产气情况，如有气

6、体严生，就可以确定为心针对本标准,中大肠菌砰的MPN值。员牡椅力裁标绅;;二:彬粋样进锥测’沼林关人5人员、工6设备