噬菌体载体复习题及答案

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1、噬菌体载体复习题及答案一、填空题cm1.噬菌体之所以被选为基因工程载体，主要有两方面的原因：①它在细菌中能够大量繁殖，这样有利于外源DNA的扩增；②对某些噬菌体(如入噬菌体)的遗传结构和功能研究的比较清楚，其大肠杆宿主系统的遗传研究的比较详尽。2.入噬菌体基因组DNA为48.5kb,根据入噬菌体的包装能力，其包装DNA限度为37〜51kb,为其本身基因组的75〜105%。将野生型入噬菌体的基因组DNA改造成插入型载体，如XZAPII,该载体的最小分子大小约为48.2kb,插入的外源片段最大不超过10.2kb。构建的入取代型载体

2、XEMBL4,基因组大小为42.36kb,填充DNA片段为14kb,可容纳的外源DNA分子最大为23kb。3.野生型的M13不适合用作基因工程载体，主要原因是没有合适的限制性内切核酸酶识别位点和选择标记。4.黏粒(cosmid)是质粒一噬菌体杂合载体，它的复制子来自质粒,COS位点序列来自入噬菌体，大的克隆片段达到45kbo8.野生型的入噬菌体DNA不宜作为基因工程载体，原因是：①分子质量大；②酶的多切点；③无选择标记。9.M13单链噬菌体的复制分为三个阶段：①SS-RF；②RF-RF；③RF->SSo二、选择题（单选或多选）

3、1.限制性内切核酸酶屁oRI在野生型的入噬菌体DNA中有5个切点，HindIII有7个切点，BanilI也有5个切点。调整这些酶切位点的数量，主要通过（A）。A.体内突变B.完全酶切后连接C.部分酶切D.先用甲基化酶修饰后再酶切2.pBluescriptM13载体在多克隆位点的两侧引入了T7和T3两个噬菌体的启动子，这样增加了该载体的功能，下述四种功能中哪一种是不正确的？（D）A.可以对插入到多克隆位点的外源片段进行转录分析B.利用这两个启动子的通用引物进行PCR扩增C.利用通用引物进行序列分析D.利用这两个启动子进行定点突变

4、3.下面关于细菌人工染色体（BAC）的特征描述，除了（C）外都是正确的。A.通过电激法将大质粒转化到大肠杆菌比酵母的转化率提高了10~100B.BAC载体在细菌中以环形超螺旋状态存在，使分离操作起来相对容易C.BAC载体在大肠杆菌宿主保持高拷贝D.克隆到BAC载体上的外源片段可以直接进行测序以获得末端序列4.以黏粒为载体转染受体菌后，平板上生长的菌落会出现大小不一、生长速度不一的现象，其原因是（D）。A.营养成分不足B.重组后的质粒复制不稳定C.重组后的黏粒整合到宿主染色体上D.重组体中插入片段的大小不同1.黏粒（Cosmid

5、）是一种人工构建的载体，（AB）。A.它具有cos位点，因而可进行体外包装B.它具有质粒DNA的复制特性C.进入受体细胞后，可引起裂解反应D.进入受体细胞后，可引起溶原化反应2.黏粒（cosmid）质粒中，C0S位点的功能是（C）。A.复制起点B.限制酶切位点C.参与包装进入病毒外壳D.选择标记E.用于筛选重组子7.关于入噬菌体，下列描述有误的是（C）。A.既能高效感染大肠杆菌，又能高效感染枯草杆B.在进入宿主细胞后，其DNA呈双链环状分子C.改造成载体后，可携带23kb以上的外源DNA片段D.重组的噬菌体易于筛选和储存Cel

6、8.下列关于黏粒载体的描述不正确的是（D）。A.是由入噬菌体与质粒DNA重组的载体A.既有质粒的特性，又有噬菌体DNA的特性（如可体外包装）A.可插入大片段的外源DNA片段D.可像YAC载体那样构建大片段的基因组文库三、判断题1.取代型载体(replacementvector)是指同一种限制性内切核酸酶在入DNA中具有两个切点。外源DNA通过:取代这两个切点间的片段被克隆。错误，不一定是同一种酶，取决于填充片段两端酶切位点2.现在最常用的pUC载体是pUC18,它的分子质量小，具有多克隆位点和易于选择的分子标记，并且是松弛型复

7、制。另外，这种载体可在辅助质粒的帮助下合成单链DNAo错误，不能形成单链3.入噬菌体DNA和M13单链噬菌体DNA在成熟前的DNA复制都是用滚环模型。正确4.M13噬菌体每个世代裂解宿主后，可释放100个子代噬菌体。错误，不裂解5.以黏粒(Cosmid)为载体的重组体虽然在平板上生长的速度不同,但是转化子中插入片段的扩增量是相同的。错误，由于重组体在平板上生长速度不同，转化子中插入片段扩增量不同四、问答题1.入噬菌体DNA被包装到噬菌体的头部需要哪些基本条件？为什么？答：①两个cos位点；②线性DNA；③分子大小在入噬菌体基因

8、组的75%〜105%。1.为什么野生型的入噬菌体DNA不宜作为基因工程载体?答：(1)噬菌体DNA没有容载能力，因为噬菌体的头部对DNA包装的量是有限制的，不能大于基因组的105%,所以要将入噬菌体改造成载体，必须削减本身的分子大小;(2)野生型的入DNA对于一些常用的酶都有