《噬菌体载体》word版

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1、第三章噬菌体载体一、填空题1．噬菌体之所以被选为基因工程载体，主要有两方面的原因：一是—-----------—；二是----------——。2．第一个报道的全测序的单链DNA噬菌体是ФX174，DNA长5386个碱基对，共一个基因，为一环状DNA分子，基因组的最大特点是—----------—。3．λ噬菌体的基因组DNA为———————kb，有——多个基因。在体内，它有两种复制方式，扩增时(早期复制)按—-----—复制，成熟包装(晚期复制)则是按—--------—复制。它有一个复制起点，进行—-------—向复制。λ噬菌体的DNA既可以以线性存在又可以环状形式存在，并且能够自然

2、成环。其原因主要是在λ噬菌体线性DNA分子的两端各有一个——个碱基组成的天然黏性末端。这种黏性末端可以自然成环。成环后的黏性末端部位就叫做——————位点。4．根据噬菌体的包装能力，将野生型λ噬菌体的基因组DNA改造成插入型载体，该载体的最小分子大小约为————kb，插入的外源片段最大不超过——————kb。5．野生型的M13不适合用作基因工程载体，主要原因是————和--------------—。6．黏粒(cosmid)是质粒—噬菌体杂合载体，它的复制子来自——、COS位点序列来自—--------—，最大的克隆片段达到—----------—kb。7．有两类改造型的λ噬菌体载体，即

3、插入型和取代型。从酶切点看，插入型为——个，取代型为——个。8．野生型的λ噬菌体DNA不宜作为基因工程载体，原因是：(1)---------------——(2)——————————(3)—---------------------—。9．M13单链噬菌体的复制分为三个阶段：(1)————————(2)—-------------—，(3)———————————。10．噬菌粒是由质粒和噬菌体DNA共同构成的，其中来自质粒的主要结构是—-----—，而来自噬菌体的主要结构是—-------------------—。11．M13单链噬菌体基因2和基因4之间的IG区有三个最重要的功能，即(1

4、)—————(2)—------------—(3)—-------------—。12．野生型的M13有10个基因，分为三个功能集团，其中与复制有关的两个基因是：——------------------和——-----------------。13．以丸噬菌体载体和黏粒载体构建文库时，起始DNA的长度是不同的，前者为—----—kb，后者为————kb。14．λ噬菌体载体由于受到包装的限制，插入外源DNA片段后，总的长度应在噬菌体基因组的—---------------—的范围内。二、判断题1．取代型载体(replacementvector)是指同一种限制性内切核酸酶在λDNA中具有两

5、个切点。外源DNA通过取代这两个切点问的片段被克隆。2.现在最常用的pUC载体是pUCl8，它的分子量小，具有多克隆位点和易于选择的分子标记，并且是松弛型复制。另外，这种载体可在辅助质粒的帮助下合成单链DNA．。3．噬菌粒(phagemid)pUCll8／pUCll9载体是集质粒和丝状噬菌体有利特征于一身的载体，既能合成单链DNA,又能合成双链DNA。4．λ噬菌体DNA和M13单链噬菌体DNA在成熟前的DNA复制都是用滚环模型。5．M13噬菌体每个世代裂解宿主后，可释放100个子代噬菌体。6．以黏粒为载体的重组体虽然在平板上生长的速度不同，但是转化子中插入片段的扩增量是相同的。三、选择题

6、(单选或多选)1．限制性内切核酸酶EcoRI在野生型的丸噬菌体DNA中有5个切点、HindⅢ有7个切点，BamHI也有5个切点。调整这些酶切位点的数量，主要通过()(a)体内突变(b)完全酶切后连接(c)部分酶切(d)先用甲基化酶修饰后再酶切2．pBluescriptMl3载体在多克隆位点的两侧引入了T7和T3两个噬菌体的启动子，这样增加了该载体的功能，如：(a)可以对插入到多克隆位点的外源片段进行转录分析(b)利用这两个启动子的通用引物进行PCR扩增(c)利用通用引物进行序列分析(d)利用这两个启动子进行定点突变上述四种功能中哪一种是不正确的?()3．下面关于细菌人工染色体(BAC)的

7、特征描述，除了()外都是正确的。(a)通过电激法将大质粒转化大肠杆菌比酵母的转化率提高了10～100倍(b)BAC载体在细菌中以环型超螺旋状态存在，使分离操作起来相对容易(c)BAC载体在大肠杆菌宿主保持高拷贝(d)克隆到BAC载体上的外源片段可以直接进行测序以获得末端序列4．以黏粒为载体转染受体菌后，平板上生长的菌落会大小不一、生长速度不一的现象，其原因是()(a)营养成分不足(b)重组后的质粒复制不稳定(c)重组后的黏粒整合到宿