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1、蛋白质晶体学简介（根据牛津大学Stuart教授的讲义译编）目录1引言………………………………………………………………………………………………12蛋白质测定的基本步骤…………………………………………………………………………23结晶………………………………………………………………………………………………44数据收集…………………………………………………………………………………………75相位测定…………………………………………………………………………………………116相位改善及扩展………………………………………………………
2、………………………157电子密度图的解释……………………………………………………………………………168修正……………………………………………………………………………………………179相关的信息……………………………………………………………………………………19参考文献…………………………………………………………………………………………191.引言蛋白质及其复合物、组装体完整的三维结构的测定是研究生命活动中分子结构与功能关系，揭示生命现象的物理化学本质的科学基础。蛋白质及其复合物晶体的X－射线衍射是研究生物大分子三维
3、精细结构的最主要的手段之一。在人类基因组全序列测定顺利完成和“后基因组时代”（Post-genomeera）到来之际，生命科学的中心任务是揭示基因组的功能,并在此基础上阐明遗传、发育、进化、功能调控等基本生物学问题，以及进一步解决与医学、环境保护、农业密切相关的问题。由于基因的功能最终总是通过其表达产物－蛋白质来实现的，因此，要了解基因组全部功能活动（包括正常的和异常的），最终也必须回到蛋白质分子上来。目前，我们还不可能只用基因组DNA的一维序列预测生命活动的机理(mechanism)和途径(pathway),也难于
4、仅用基因的信息去解释疾病发生与发展的分子机理。显然，在人类基因组测序完成之后的时代，在有关生命活动整合知识的指导下，以蛋白质及其复合物、组装体为主体的生物大分子的精细三维结构及其在分子、亚细胞、细胞和整体水平上的生物学功能的研究是生命科学的重大前沿课题，也是当前生物学领域中最具有挑战性的任务之一，在后基因组时代生物学发展中处于战略性的关键地位。蛋白质晶体学是一门十分活跃的边缘学科，1960年－1997年之间已经有12名蛋白质晶体学家荣获诺贝尔奖。蛋白质晶体学不仅与生物学、医学有着密切联系,它的发展也需要物理学、化学数
5、学等学科以及计算机科学作为它的基础。蛋白质晶体学也是一门发展很快的年轻学科。从1934年Bernal得到胃蛋白酶单晶衍射照片算起,也仅有66年的历史。但无论从结构测定的方法还是从结构测定所用的仪器都有了飞跃的发展。多对同晶重原子置换法（MIR）的提出，使蛋白质晶体结构分析在方法上有了重大的突破；以后又有了分子置换法（MR）；由于可变波长的同步辐射加速器的应用,近年来又发展了多波长反常散射法（MAD）。随着科学技术的发展,高速大容量计算机的出现,在衍射数据的收集方法上经历了一个否定之否定螺旋式上升的发展。从最初的有层线
6、屏的底片法,到以后有计算机控制的逐点收集的衍射仪法,到目前有各种形式的面探测器,大大加快了衍射数据收集的速度。X-射线光源的强度也有了极大的提高,第三代同步辐射加速器，结合Laue法的应用,使晶体学出现了一个崭新的领域，研究时间分辨的动态晶体学。因此,以一章的篇幅,把蛋白质晶体学作一个全面完整的介绍,那是很困难的。牛津大学Stuart教授是国际上最著名的结构生物学家之一，笔者聆听过他在牛津大学的“蛋白质晶体学讲座”，他以他多年来在该研究领域成功的经验、独特的手笔介绍了该领域的基础本概念和最新方法。正因为如此，并征得他
7、本人同意,本讲义将他的讲稿为主,而不另写（也因为限于笔者的水平）。希望读者建立起对蛋白质晶体学这门发展中的学科的正确的、国际规范化的全新的概念，为此，本讲义还将附加中英文专业术语解释；同时了解当前最新的研究方法，特别是在实际应用中的经验和特别需要注意的问题，这一点与其它同类书籍有着很大的不同，这不但对于正在从事生物大分子晶体结构测定的研究人员也具有极其重要的参考价值，同时可以作为其他相关学科对蛋白质晶体学有兴趣的本科生、研究生和科研人员的入门书。此外，蛋白质结晶学是一个专业跨度较大，同时专业性又非常强的领域,因此,本
8、讲义仅仅是试图让大家建立起对蛋白质结晶学这门学科的正确的概念，同时也概括了当前研究中最新的方法以及必要的基本原则。更详细的参考书、有关结构解析的程序包、网页地址、有关国际组织及数据库的分类在讲义的最后部分中列出。2蛋白质结构测定的基本步骤X射线晶体学可在原子或接近原子的水平上分析蛋白质的精细三维结构。3?以上分辨率的蛋白质精细结构可提供丰富的信
