东祁连山高寒草地土壤3种高山被孢霉生物学特性测定

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1、东祁连山高寒草地土壤3种高山被胞霉生物学特性测定摘要：通过对东祁连山高寒草地土壤3种高山被胞霉(❷Mortierellaalpina❷)生物学特性测定，结果表明:不同处理下3种高山被砲霉的生物学特性具有显著差异，3种高山被胞霉在pH4〜9范围内均能生长，最适宜pH为7；M.ap27和M.ap60的最佳光照强度为600lx,而M.ap9的最佳光强为400lx；3种高山被胞霉的最适湿度为75%；M.ap27的最适碳源为淀粉，M.ap60的最适碳源为蔗糖，M.ap9的最适碳源为葡萄糖；M.ap27,M.ap60和M.ap9的最适氮

2、源均为蛋白月东。关键词：高寒草地土壤；高山被砲霉；生物学特性中图分类号：S812文献标识码：A文章编号：1009-5500(2012)04-0067-04高山被胞霉是一种丝状的腐生菌，含有丰富的多糖和蛋白质。广泛分布于土壤内、牲畜的粪便中及其他腐败的有机物质上［1］。1987年Totani首次发现高山被鞄霉，隶属于接合真菌亚门。作为自然界的拓荒者，可以直接发酵生产糖化酶和蛋白酶类等，同时，还可以发酵生产(GLA)等有机酸［2］。根据医学研究相关报道，GLA具有诸多药用价值和营养价值，对糖尿病、心脏病、高血压、高血脂、中风、过

3、敏性湿疹等疾病都具有明显的疗效、可促进被酒精损伤肝功能的恢复，对免疫系统疾病具有调节作用［3,4］。另外，由于高山被鞄霉的生长繁殖速度快、资源丰富、油脂含量高、生长周期短、碳源利用谱广和不受气候限制等特点，这就有利于实现大规模生产，这一工业生产研究就是要加快微生物油脂发酵技术创新和产业化进程，可为我国未来生物柴油产业化和油脂化工行业的健康发展提供保障。随着现代生物技术的发展使产油微生物的研究技术在不断趋向成熟。1988年Shimizu等［5］认为高山被胞霉是可以进行商业化生产的一个潜在资源，同时，高山被胞霉也被认为是产生多价

4、不饱和脂肪酸的优良微生物［6,7］,国内对高寒草地土壤真菌的研究刚刚起步，而高山被胞霉是东祁连山高寒草地土壤真菌中的优势种群［8］。另外，高山被鞄霉用于产业化生产所要求的指标不仅要合成高水平的不饱和脂肪酸酯，也要有较高的生物量，要达到此目的，适宜的营养成份及配比对提高胞子萌发率、增加菌丝分枝和强壮菌丝体都是十分重要［9］。因此，研究以3种高山被胞霉为对象，单因素对不同碳氮源、温度、pH、湿度及光照强度等培养条件进行摸索，以期找到高山被胞霉菌丝生长最佳的培养条件，从而为高山被胞霉的进一步研究提供理论依据。1材料和方法1.1供试

5、菌株供试菌株M.ap27,M.ap60和M.ap9是由课题组从东祁连山高寒草地土壤中分离获得，由甘肃农业大学草业学院微生物实验室保存。1.2供试培养基PDA培养基由马铃薯200g、琼脂8g、葡萄糖❷20g.Hg201000mL,用于3种高山被砲霉菌种活化；察氏培养基NaNO❷❷33g.K❷❷2HP0❷❷41g.MgSO❷❷4-7Hg200.5g、KCI0.5g、FeS0g40.01g、30g、琼脂20g、H令❷201000mL,用于供试菌株生长温度和pH的筛选测定；基础培养基为FeSO❷❷40.01g、KCI0.5g、Kg2

6、HP0g4❷1g、琼脂8g、H❷令201000mL,用于高山被胞霉利用碳、氮源的对照；供试碳源培养基是在基础培养基中，加入0.2%NaN0g3,再分别加入3%葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、淀粉、乙酸钠等碳源，各处理重复3次；供试氮源培养基也是在基础培养基中，加入3%葡萄糖，再分别加入0.2%KN0X3、尿素、氯化铁、蛋白勝、硝酸铁等氮源，各处理重复3次。1.3试验方法1.3.1pH值对菌落生长的测定从实验室挑选出3株高山被胞霉接种到PDA培养基上活化培养，用直径0.6cm的打孔器切取菌饼，分别接种于察氏培养基，制备好的PDA培养基利

7、用酸度计,通过0.1mol/LNaOH溶液和0.1mol/LHC1溶液将培养基浓度调节为4、5、6、7、8、9不同的6个梯度，再将活化好的供试菌株分别点接在培养基上，各处理重复3次。❷25£恒温培养7d,利用十字交叉法测量并记录菌落直径。连续测量5次，计算出菌落的平均生长速率。所得数据用DPS软件进行方差分析。1.3.2光照强度对菌落生长的测定将活化好的供试菌株接到察氏培养基之后，置于可控光照培养箱内，分别将光照强度设置为200lx、400lx、600lx、800lx,以没有光照的处理为对照。培养方法同1.3.1所述。1.3

8、.3湿度对菌落生长的测定将3种高山被砲霉接种到察氏培养基中，利用浓硫酸将湿度调节为10%、25%、35%、50%、65%、75%、90%（表］）［10］,培养方法同1.3.1所述。1.3.43种高山被胞霉对多种碳源、氮源利用能力的测定将待测菌株点接到供试碳源培养基或氮源培养基上，其中，供试