Pr-PT-2004 猪丹毒菌种(GC42株)生产工艺规程

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1、磐石益格生物科技发展有限公司生产车间工艺规程参考号:Pr-PT-2004版本:1生效日:2013-07-10标题:猪丹毒菌种（GC42株）生产工艺规程目录1.目标22.适用范围23.定义和缩略语24.关联文件25.程序25.1.生产工艺质量控制要点25.2.生产指令25.3.开种25.4.选种35.5.二级种子制备46.附件41.第4页共6页磐石益格生物科技发展有限公司生产车间工艺规程参考号:Pr-PT-2004版本:1生效日:2013-07-10标题:猪丹毒菌种（GC42株）生产工艺规程1.目标建立猪丹毒菌种（GC42株）生产工艺规程，使生产工艺标准化、规范化，保证制品质量，防止污染和交叉

2、污染。2.适用范围适用于猪丹毒菌种（GC42株）生产工艺。3.定义和缩略语猪丹毒菌种（GC42株）、生产工艺规程4.关联文件5.程序5.1.生产工艺质量控制要点5.1.1.生产区域要求菌种开种、做小种等重要的操作均在万级区域内的局部百级区域下进行，菌种培养等工序在万级洁净区域，培养基消毒、各种用具消毒、培养基制备、物品包扎等工序在十万级洁净区。5.1.2.质量控制要点生产工艺质量控制要点如下表制备过程控制点质量控制项目频次菌种继代，不超10代每批马丁琼脂平皿选种代次，不超5代每批二级种子培养培养温度，36～37℃每批培养时间，10～22小时每批二级种子存放2－8℃，不超3天每批菌种检测纯粹检

3、验，应纯粹每批5.2.生产指令1.生产指令单制定，由车间经理签字确认。2.接收人在接到生产指令单后，签字确认。5.3.开种5.3.1.操作前检查1.是否无上批遗留物品。2.操作室是否有“已清洁”状态标识。3.使用的物品及用具是否符合生产规定。第4页共6页磐石益格生物科技发展有限公司生产车间工艺规程参考号:Pr-PT-2004版本:1生效日:2013-07-10标题:猪丹毒菌种（GC42株）生产工艺规程4.提前半小时打开局百。1.1.1.开种1.领回菌种后。2.用经蒸汽高压灭菌的注射器，吸取适量（约2～3毫升）马丁肉汤溶化稀释菌种。3.用同一注射器吸取菌种稀释液，移植接种到鲜羊血马丁琼脂斜面和

4、纯粹检验培养基中，每管0.2～0.3毫升。4.置36～37℃培养22～24小时。5.观察长菌情况，纯粹者作为基础种子，置于2～8℃冰箱保存备用。每半个月移植传代一次，使用期限不超10代1.1.2.清场1.移出废弃物及使用过物品。2.清洁操作室及设备。3.专人复核后，悬挂“已清洁”状态标识。1.2.选种1.2.1.操作前检查1.是否无上批遗留物品。2.操作室是否有“已清洁”状态标识。3.使用的物品及用具是否符合生产规定。4.提前半小时打开局百。1.2.2.明胶选种1.取出移植在新鲜羊血马丁琼脂斜面的菌种，用马丁汤洗下菌苔。2.用马丁汤作10倍递进稀释。3.按10-6、10-7、10-8接种于明

5、胶平皿，每个滴度划皿2个，每皿0.2ml。4.置36～37℃培养16～22小时。5.置15℃培养3～5天，每天用低倍显微镜进行检查。明胶平皿划皿接种一定要在15～18℃环境，以防明胶培养基自容。6.猪丹毒杆菌弱毒菌株在明胶平皿上的培养特性应是灰白色、不透明的圆形小菌落，在低倍显微镜下呈浅黄色，中心可见核样结构，周边有向外生长的短毛样分支。挑出典型菌落30个，移植于新鲜羊血马丁琼脂斜面。7.置36～37℃培养24小时。8.取出存于2～8℃冰箱内。传代菌种每月进行明胶选种一次。1.1.1.马丁琼脂平皿培养基选种经明胶平皿培养挑选的菌种，还需通过马丁琼脂平皿培养基选种。1．取从明胶平皿选出并移植在

6、新鲜羊血马丁琼脂斜面的菌种，用马丁汤洗下菌苔。2．用马丁汤作10倍递进稀释。3．按10-6、10-7、10-8接种于含有0.1%裂解全血及4%健康动物血清的马丁琼脂平皿上。4．置36～37℃培养36～48小时。5．挑选中等大小圆整光滑型，在低倍显微镜下呈周围有微小波纹、中部有黄褐色点状颗粒的典型菌落30个，混合接种羊血斜若干支，连同菌落供选皿。6．置36～37℃培养24小时。7．观察长菌情况，若菌落供选皿无杂菌生长，移植血斜亦纯粹，则菌种斜面置于2～8℃保存备用，作为一级种子，如有杂菌生长，应弃去重选。第4页共6页磐石益格生物科技发展有限公司生产车间工艺规程参考号:Pr-PT-2004版本:

7、1生效日:2013-07-10标题:猪丹毒菌种（GC42株）生产工艺规程1.1.1.清场1.移出废弃物及使用过物品。2.清洁操作室及设备。3.专人复核后，悬挂“已清洁”状态标识。1.2.二级种子制备1.2.1.操作前检查1.是否无上批遗留物品。2.操作室是否有“已清洁”状态标识。3.使用的物品及用具是否符合生产规定。4.提前半小时打开局百。1.2.2.二级种子制备1.制备猪丹毒弱毒菌种二级种子的培养基为猪丹毒