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时间:2017-11-29
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1、管灸治疗面神经炎的机制研究怎样进行机制研究?管灸作为灸法治疗的一种,主要用于治疗面神经炎、神经性耳聋等疾病。采用人类疾病动物模型进行治疗机制研究是目前国内外最常用的方法。因此我们通过建立家兔面神经损伤模型,采用管灸和电针进行治疗,对其机理进行研究,同时和电针进行对比。所运用的技术病理形态学技术形态计量学原位杂交RT-PCR病理学技术分子生物学技术检测内容神经组织病理形态测量髓鞘厚度、神经束神经纤维总数、神经纤维直径、轴突面积和神经束面积,颊肌组织。神经营养因子表达水平面神经核、面神经、表情肌中神经生长因子(NGF)、神经营养因子-3(NT-3)表达水平。
2、拟解决的问题对损伤面神经是否具有促进修复作用?修复的机制是什么?对临床运用管灸有什么指导作用?操作流程分组模型制作治疗检测动物分组分组模型组制作面神经损伤模型,但不做任何治疗电针组制作面神经损伤模型,给予电针治疗假手术组仅手术暴露面神经,但不损伤面神经管灸组制作面神经损伤模型,给予管灸治疗模型制作方法家兔麻醉后取耳屏前至下颌角下缘“S”形切口,钝性分离暴露面神经颊支,用同一特定钳于瞳孔下正对神经干处一扣压榨30秒钟、松开30秒钟、再压榨30秒钟后(SunderlandIII度损伤的力度),用缝线标记损伤段,缝合皮下及皮肤层。假手术组动物暴露双侧面神经颊支
3、,钝性分离面神经后,不予压榨即缝合皮下及皮肤层。术后常规抗感染治疗5天后开始治疗,每天1次,6天为一疗程,疗程间隔1天。⑴假手术组:常规饲养,仅做术后常规抗感染治疗。⑵模型组:常规饲养,仅做术后常规抗感染治疗。⑶电针组:常规饲养,治疗时用兔台固定,选用双侧翳风,直刺1.0cm;颊车,直刺0.5cm;下关,直刺0.5cm;合谷,约当第2掌骨中点桡侧,直刺1.0cm。其中翳风与颊车采用强度为20~100Hz(波型间动频为30次/min);电压2~4V,强度由小逐渐增大,电针时间30min;治疗时间每次30分钟。⑷管灸组:照常饲养,治疗时用兔箱固定,取2g艾绒
4、置入特制的管灸器中,点燃后将软管插入家兔双侧外耳道约2cm,施以熏灸,每次约30分钟。各组分别于第一、二、四疗程后随机选择7只动物处死,按相应的要求取材进行相关指标检测。实验结束时切取一侧面神经核、标记段的面神及颊肌组织冻于液氮中保存以备RT-PCR检测,切取动物另一侧面神经核、部分标记段面神经及颊肌组织,经4%多聚甲醛/0.1molPBS(Ph7.0~7.6),含有1/1000DEPC中固定4hr,全自动组织脱水机处理,石蜡组织包埋机包埋,石蜡组织切片机连续作4μm厚切片。将切片裱贴于原位杂交专用玻片上。其余面神经分别固定于4%甲醛-钙液及10%甲醛中
5、。损伤近、远点作横断石蜡包埋,损伤处作纵断石蜡包埋,分别作HE染色、水溶性猩红-亮绿双重染色。观察神经纤维结缔组织、雪旺细胞、髓鞘、轴突的病理改变。采用Image-ProPlus5.0图像分析系统测量髓鞘厚度、神经束神经纤维总数、神经纤维直径、轴突面积和神经束面积。颊肌组织亦作HE染色,光镜观察肌肉组织病理改变情况。模型制作流程压榨面神经分离面神经标记损伤部位模型制作流程面神经钳子丝线病理检测方法病理切片HE染色猩红-亮绿染色神经纤维数、纤维直径髓鞘厚度、轴突面积神经束面积髓鞘厚度、轴突面积比较组别 髓鞘厚度(μm)轴突面积(μm2)第一疗程 第二
6、疗程第四疗程第一疗程 第二疗程 第四疗程假手术组1.52±0.53▲▲1.54±0.62▲▲1.58±0.58▲▲8.25±1.51▲▲8.97±1.42▲▲8.35±1.46模型组0.72±0.150.76±0.240.86±0.165.35±0.925.86±1.027.52±1.38管灸组0.82±0.18 1.22±0.31▲1.38±0.32▲6.17±1.027.84±1.33▲13.93±2.21▲▲电针组0.79±0.221.18±0.26▲1.29±0.27▲5.93±0.987.36±1.24▲12.69±1.83▲▲注:与模型
7、组比较,▲:p<0.05;▲▲p<0.01;与电针组比较★p<0.05;★★p<0.01病理检测结果神经束面积比较组别第一疗程 第二疗程 第四疗程假手术组43572±1439▲▲42965±1241▲▲43198±1395模型组29856±115336858±132445372±1691管灸组32084±1584▲40889±1729▲▲59496±3574▲▲电针组30928±136539662±1903▲▲53751±3318▲▲注:与模型组比较,▲:p<0.05;▲▲p<0.01;与电针组比较★p<0.05;★★p<0.01病理检测结果神经纤
8、维数、纤维直径比较组别神经纤维数(条) 纤维直径(μm)第一疗
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