实验10 细菌菌落总数(CFU)的测定

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1、细菌菌落总数（CFU）的测定大连理工大学环境与生命学院实验目的1.学习并掌握细菌分离的原理与方法2.掌握细菌菌落总数的测定实验仪器高压灭菌锅实验仪器培养箱洁净工作台实验原理细菌总数主要作为判定被检水样污染程度的标志。在水质卫生学检验中，细菌菌落总数(CFU)是指lmL水样在营养琼脂培养基(LB培养基)中，于37℃培养24h后所生长的腐生性细菌菌落总数。它是有机物污染程度的指标，也是卫生指标。实验步骤1.取样用无菌锥形瓶到现场取一定量的活性污泥或土壤或湖水，迅速带回实验室。实验步骤2.稀样水样实验步骤3.接种如上图,从试管中分别吸取1mL菌液于相应编号的

2、培养皿内。加热融化培养基，当培养基冷至45℃左右时，向培养皿中倒入培养基，然后将其平放在桌上，顺时针和反时针来回转动培养皿，使培养基和菌液充分混匀，冷凝后即成平板，倒置于37℃培养箱内培养24h。实验步骤4.计菌落数将培养24h的平板取出计菌落数。菌落计数及报告方法用肉眼观察，计平板上的细菌菌落数。记下同一浓度的三个平板的菌落总数，计算平均值，再乘以稀释倍数即lmL水样中的细菌菌落总数。菌落计数及报告方法各种不同情况的计算方法如下：1.首先选择平均菌落数在30－300之间者进行计算，当只有一个稀释度的平均菌落符合此范围时，则以该平均菌落数乘其稀释倍数报

3、告之（例1）。菌落计数及报告方法2.若有两个稀释度的平均菌落数均在30－300之间，则按两者之菌落总数之比值来决定，若其比值小于2应报告两者之平均数，若大于2则报告其中较小的菌落总数（例2及例3）。3.若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（例4）。菌落计数及报告方法4.若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（例5）。5.若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300之间，则以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（例6）。菌落计数及报告方法6.在求同稀释度

4、的平均数时，若其中一个平板上有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌落约为平板的一半，而另一半平板上菌落数分布很均匀，则可按半平板上的菌落计数，然后乘以2作为整个平板的菌落数。稀释度选择及菌落总数报告方式思考题在用平板培养微生物时，平板为什么倒置放在培养箱中？