倾注平板法测定水中细菌菌落总数

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1、实验1倾注平板法测定水中细菌菌落总数一、实验目的了解水中菌落总数测定的意义，原理；熟悉水样的采集与保存；掌握倾注平板法测定水的菌落总数的技术方法，及正确进行结果的卫生评价。二、实验原理样品中的微生物细胞充分分散开，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，单个细胞及聚在一起的细胞可以生长繁殖，形成一个肉眼可见的菌落，统计菌落数目，即可用以评价样品中的微生物的数量。水中细菌菌落总数是指1ml水样在营养琼脂培养基中，37℃经24h培养后所生长的菌落数。用平板菌落计数测定水中细菌菌落总数，仅包括一群在营养琼

2、脂上生长发育的嗜中温性需氧的和兼性厌氧的细菌菌落总数。三、仪器与试剂营养琼脂、高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、灭菌平皿、放大镜、灭菌采样瓶、灭菌刻度吸管、制备培养基用一般设备:量筒，三角烧瓶，pH计或精密pH试纸等。四、实验方法检验程序：37℃24h做成几个适当倍数的稀释液选择2~3个适宜稀释度，各以1ml分别加入灭菌平皿内，每个浓度同时做2个平皿。同时做营养琼脂空白对照。每皿加入适量营养琼脂菌落计数报告水样操作步骤：1、检测细菌的水样采集与保存1）选择容量500ml的磨口带塞无色细口瓶，在采样前必须洗净

3、，瓶口包扎后灭菌备用。2）按无菌操作采集水样，采水量为瓶容量的80％左右，以便检验时充分摇动，使菌胶团分散。3）在采集加氯消毒水样时，采样瓶应在消毒前，按每500ml水样加入1.5％硫代硫酸钠溶液2ml，以中和水中的余氯，终止氯的持续杀菌作用；然后，121℃高压灭菌20min备用。4）水样采集后，应立即记录水样名称、时间、地点等项目，从速检验，一般不应超过2h，置冰箱保存时也不应超过4h。2、水样的检测1)用力振摇水样20～25次，以分散可能存在的菌胶团。2)以无菌操作法吸取10ml充分混匀的水样，注

4、入盛有90ml灭菌水的玻璃瓶中，混匀成1:10稀释液。3）吸取1:10稀释液1ml注入盛有9ml灭菌水试管中，混匀成1:100稀释液，按同法依次稀释成1:1000、1:10000稀释液等备用。吸取不同浓度的稀释液时，每次必须更换吸管。4）用1ml无菌吸管吸取2～3个适当浓度的稀释液1ml，分别注入无菌平皿中，每个稀释度同时做2个平皿，不同稀释度更换吸管。5）倾注约15ml己融化并冷却到45℃左右的营养琼脂于上述平皿中，并立即旋转平皿，使水样与琼脂充分混匀。每次检验时另用一个平皿只倾注营养琼脂作空白对照

5、。6）待平皿内琼脂冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置37℃培养24h。3、菌落计数在记下各平板上的菌落数后，应求出同一稀释度的平均菌落数，供计算时使用。在求同一稀释度的平均数时，若其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜计数，应以没有片状菌落生长的平板计数平均菌落数。若片状菌落不到平板的一半，而另一半中菌落分布均匀，则可用计数一半平板上生长的菌落数乘2，代表整个平板上的菌落数。然后再求该稀释度的平均菌落数。不同情况下的计算方法：1）首先选择平均菌落数在30～300之间者进行计算，当只有一个稀释度的平

6、均菌落数符合此范围时，即以该平均菌落数乘以其稀释倍数报告。2）若有两个稀释度，其平均菌落数均在30～300之间，则应按两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于2，应报告菌落的平均数；若比值大于2，应报告其中较少的菌落。3）若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应该按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告。4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告。5）若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，则应以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告。报告方式

7、：菌落数在100以内时，按实有数报告；大于100时，采用两位有效数字乘以10的指数来表示．在两位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算在报告菌落数为“无法计数”时，应注明水样的稀释倍数。检验结果记录：稀释度10-110-210-3平板号121212菌落数平均菌落数菌落总数五、结果意义细菌菌落总数用以说明水被有机物污染的程度。我国生活饮用水卫生标准中规定lml生活饮用水中，细菌菌落总数不得超过100个。六、注意事项1、实验开始前，应先将各稀释管、平皿做好标记，包括：稀释度、小组等。2、进行水样的稀释时，

8、吸管的更换：每支吸管吹打混匀本稀释度的水样，然后吸取1ml水样注入到下一支无菌水管后（不要插入到无菌水中）即弃去，再用新的吸管在下一稀释度重复上述操作。3、倾注平板前注意琼脂的温度，不要太烫和太凉，否则使细菌烫伤和使琼脂凝固。预先融化的琼脂可放入45℃水浴保温。4、37℃培养24h后，做平板计数时，可用肉眼观察，必要时可用放大镜检查，以防遗漏。