1.1 DNA重组技术的基本工具课件

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1、专题一：基因工程1.1DNA重组技术的基本工具一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀”1名称来源：限制性核酸内切酶，又称限制酶主要从原核生物中分离纯化。2作用特点：识别特定核苷酸序列，使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。1.种类与命名现在已经从约300种微生物中分离出了约4000种限制性内切酶(限制酶)。粘质沙雷氏杆菌（Serratiamarcesens）SmaⅠ大肠杆菌（EscherichiacoliR）EcoRⅠ练习：流感嗜血杆菌的d菌株(Haemophilusinfluenzaed)中先后分离到3种限制酶，则分别命名为:HindⅠ、HindⅡ和HindⅢ命名方法

2、1.作用特点——断开磷酸二酯键磷酸二酯键T12345A12345HHHHHOT12345A12345HHHHOH2O+1.作用特点——断开磷酸二酯键限制酶DNA解旋酶区别限制性内切酶与DNA解旋酶的区别切割特定的核苷酸序列的磷酸二酯键将DNA两条链的氢键打开形成两条单链限制酶DNA水解酶区别限制性内切酶与DNA水解酶的区别切割特定的核苷酸序列的磷酸二酯键，形成片段的DNA.切割磷酸二酯键，形成单个的脱氧核苷酸。1.作用特点——断开磷酸二酯键限制酶的识别序列——回文序列回文序列：在切割部位，一条链正向读的碱基顺序与另一条链反向读的顺序完全一致。1.作用特点——断开磷酸二酯键EcoRⅠ

3、黏性末端黏性末端1.作用特点——断开磷酸二酯键SmaⅠ平末端　　　平末端二、“分子缝合针”——DNA连接酶1种类：⑴E·coliDNA连接酶⑵T4DNA连接酶2作用：恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。3作用原理：催化磷酸二酯键形成1.连接酶类型类型E·coliDNA连接酶T4DNA连接酶来源功能大肠杆菌T4噬菌体恢复磷酸二酯键只能连接黏性末端能连接黏性末端和平末端(效率较低)相同点差别2.E·coliDNA连接酶或T4DNA连接酶恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键3.T4DNA连接酶T4DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低T4DNA连接酶

4、4.比较：DNA连接酶与DNA聚合酶DNA聚合酶DNA连接酶区别1区别2相同点1)只能将单个核苷酸连接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键形成磷酸二酯键1)在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键2)以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键连接成一条互补的DNA链2)将DNA双链上的两个缺口同时连接起来，不需要模板三、“分子运输车”——载体1载体需要的条件：⑴有1~多个限制酶切点⑵对受体细胞无害⑶导入基因能在受体细胞中复制、表达⑷有某些标记基因，便于筛选2常用运载体：⑴细菌的质粒⑵λ噬菌体衍生物或某些动植物病毒。