1.1+DNA重组技术的基本工具

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1、布雷斯塔警长鹰的眼睛,狼的耳朵,豹的速度,熊的力量1.1DNA重组质技术的基本工具专题一：基因工程基因工程又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。通俗地说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状.回顾：什么叫基因工程？基因工程的别名操作环境操作对象操作水平基本过程原理结果基因拼接技术或DNA重组技术生物体外基因DNA分子水平人类需要的基因产物剪切→拼接→导入→表达基因重组基因工程基因工程操作的四个基本步骤1）提取目的基因2）目的基因

2、与运载体结合3）将目的基因导入受体细胞4）目的基因的检测和表达基因工程培育抗虫棉的简要过程：普通棉花(无抗虫基因)苏云金芽孢杆菌提取抗虫基因与运载体DNA拼接导入棉花细胞(含抗虫基因)转基因棉花植株上述培育抗虫棉的关键步骤是什么？提取基因基因与运载体DNA连接基因导入棉花植株剪刀限制性核酸内切酶针线DNA连接酶运载体所需工具识别某种双链DNA分子____________，使每一条链中两个核苷酸之间的____________断开。(具专一性)主要是从__________中分离纯化出来的。约4000种1、来源

3、：2、种类：3、作用：4、结果：5、命名形成两种末端黏性末端平末端原核生物特定的核苷酸序列磷酸二酯键P7问题2一、限制性内切酶“分子手术刀”2.简式:A—P～P～P腺苷磷酸基团高能磷酸键30.54KJ/mol核糖PPP~~腺嘌呤1.中文全称:三磷酸腺苷ATP分子中具有高能磷酸键一分子ATP中含有的腺苷、高能磷酸键和磷酸基团的数目依次为A、1，3，2B、1，2，1D、2，3，1C、1，2，3ATP的水解过程A–P～PPPi能量为生命活动提供能量A–P～P(ADP二磷酸腺苷)ATPADP+Pi+能量酶细胞分裂

4、、营养物质吸收神经系统活动、肌肉收缩～1、组成元素：三、核酸的分子结构2、基本单位：核苷酸脱氧核糖核苷酸核糖核苷酸3、核苷酸链脱氧核糖核苷酸链——2条核糖核苷酸链——1条4、核酸DNARNAC、H、O、N、P核酸水解核苷酸核苷酸分子简式一个核苷酸一分子含氮碱基一分子五碳糖一分子磷酸两种核苷酸比较五碳糖为脱氧核糖时为脱氧核糖核苷酸（简称脱氧核苷酸）五碳糖为核糖时为核糖核苷酸DNARNA碱基的种类腺嘌呤A鸟嘌呤G胞嘧啶C胸腺嘧啶T尿嘧啶U核酸中共有多少种碱基？DNARNADNA:A.G.C.TRNA:A.G.

5、C.UT磷酸二酯键1234512345A大肠杆菌(EcoRI)的一种限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。限制酶EcoRI限制酶的切割：中轴线黏性末端黏性末端在G与A之间切割大肠杆菌的一种限制酶(EcoRⅠ)只能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。黏性末端黏性末端黏性末端：被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。什么叫平末端？平末端是如何形成的？当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的

6、切口叫平末端。SmaI限制酶的切割：只能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切开。当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，产生的是平末端。当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时，产生的是黏性末端。要想获得某个目的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？一个目的基因有几个黏性末端？要切两个切口，产生四个黏性末端，两个。如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？会产生相同的黏性末端。是不是把两者的黏性末端黏合起来，这样就真的合成重组的DNA分子了?实际还不够,还需要DNA连接酶进行连接

7、。思考题：二、DNA连接酶——“分子缝合针”1、种类：2、作用部位：3、结果：两类E·coliDNA连接酶T4DNA连接酶磷酸二酯键两个相同的黏性末端的连接连接黏性末端连接黏性末端和平末端DNA连接酶连接黏性末端之间的磷酸二酯键，形成重组的DNA分子。DNA连接酶DNA聚合酶连接DNA链双链单链连接部位在两DNA片段之间形成磷酸二酯键，不需模板。将单个核苷酸形成磷酸二酯键连接起来,需模板。DNA聚合酶和DNA连接酶有何相同点和不同点？三、基因进入受体细胞的载体—“分子运输车”常用的运载体主要有两类：1）细

8、菌细胞质的质粒2）噬菌体或某些动植物病毒运载体条件：1.能够在宿主细胞内复制并稳定保存；2.具有多个限制酶切点以便与外源基因相连；3.具有标记基因，如抗四环素的抗性基因。便于进行鉴定和筛选．4.对受体细胞无害，容易分离，大小合适能带着插入的目的基因一起复制有切割位点标记基因的作用鉴别受体细胞中是否含目的基因。如将来可用含青霉素的培养基鉴别，将含目的基因的细胞筛选出来。运载体的作用:一：将外源基因转移到受体细胞中。二：利用运载体