血型鉴定抗体筛选交叉合血

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1、输血和输血技术试验实验内容血型鉴定抗体筛选交叉配血血型鉴定目的掌握红细胞ABO血型及Rh血型鉴定原理ABO血型鉴定：根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，以及血清中有无抗A及抗B，可以将血型分为A型、B型、AB型、O型四种，利用红细胞凝集实验通过正定型、反定型准确鉴定ABO血型。Rh血型鉴定：IgM型盐水抗D试剂能够与D阳性红细胞在盐水介质中形成肉眼可见的凝集。原理试剂抗A及抗B血清（商品试剂）5%A型和B型红细胞（试管法）10%A型和B型红细胞（玻片法）IgM型盐水抗D试剂标本抗凝静脉血EDTA-K2红细胞ABO血型鉴定（试管法正定型）标记两支干净的试

2、管-A和-B在标记为-A的试管中加1滴抗A试剂。在标记为-B的试管中加1滴抗B试剂。在每个试管中各加入5%受检者红细胞悬液(1份压积红细胞+19份0.9%盐水)轻轻混匀，1000g离心1分钟。检查上清液是否有溶血。轻轻重悬细胞扣，检查凝集。红细胞ABO血型鉴定（试管法反定型）标记两支干净的试管Ac和Bc每管加入2滴受检者血清。在标记Ac的试管中加入1滴5%A型试剂红细胞。在标记Bc的试管中加入1滴5%B型试剂红细胞。轻轻混匀，1000g离心1分钟。检查上清有无溶血。轻轻重悬细胞扣，检查凝集。判断并记录结果。红细胞ABO血型鉴定（玻片法）在标记的玻板上分别

3、加一滴抗A、抗B。各加一滴10%受检者红细胞悬液(1滴压积红细胞+9滴0.9%盐水)轻轻混匀，室温放置2-15分钟。观察并记录结果：凝集为阳性结果，不凝集为阴性结果，对结果有怀疑，应用试管法重新实验。红细胞Rh血型鉴定试管法标记一支75×12mm的试管加入抗D血清1滴，加1滴5%的待检细胞。轻轻混匀，1000g离心1分钟，或3000r/min，15秒。检查是否溶血，然后轻轻重悬细胞扣，检查凝集玻片法在玻板上标记待检红细胞编号。加入抗D血清1滴于标记玻片中。将35－45%的待检细胞1滴滴入玻片并混匀。室温放置2分钟左右观察结果。结果判读（ABO血型鉴定）正

4、定型反定型血型抗A抗BA细胞B细胞O细胞--++-O+--+-A-++--B++---AB结果判读（Rh血型鉴定）阳性对照阴性对照待检细胞结果+-+++---报告方式XXX型，Rh+/-注意事项玻片、试管都要标记！！！A及B标准血清绝对不能相混,不要依靠用染料颜色标记血清。所用玻片、试管实验前必须清洗干净，以免出现假凝集现象。红细胞悬液滴管头不能接触标准血清液面，一般先加血清，再加红细胞悬液，便于核实是否漏加血清。离心时间、速度严格要求。要在光亮的背景下观察凝集,可使用光镜检查小的凝集,同时应注意观察凝集强度，有助于A、B亚型的发现，观察后立即记录。抗体

5、筛选目的掌握抗体筛选的试验方法盐水试验法白蛋白介质法低离子强度介质法（LISS）酶技术抗球蛋白试验聚凝胺促凝技术PEG促凝技术原理抗人球蛋白法：IgG类抗体，由于其分子量小，与红细胞结合以后在盐水介质中不发生肉眼可见的凝集，称为不完全抗体。但在加入抗-IgG的抗体后，以其搭桥则可出现凝集。试剂抗球蛋白试剂阳性对照血清阴性对照血清O型红细胞生理盐水标本：抗凝静脉血（EDTA-K2）操作步骤在标记好的试管中各加入两滴血浆和一滴5%的O型红细胞，混匀。于370C孵育一小时。用生理盐水洗涤红细胞4-6次，完全倾尽末次洗涤盐水。向得到的干细胞扣中加入1-2滴抗球蛋

6、白试剂。1000rpm，离心1分钟。检查凝集并记录结果。结果判读加入抗球蛋白试剂后，如红细胞出现凝集或溶血，则结果为阳性。加入抗球蛋白试剂后结果为阴性，而加入直抗阳性对照细胞后呈阳性反应，则结果为阴性。如加入直抗阳性对照细胞后呈阴性反应，则结果不可靠，必须重复检测。操作步骤阳性对照管待检管阴性对照管IgG型抗D1待检血清2阴性对照血清25%O型试剂红细胞111在标记好的试管中按下表加入试剂及血清。ABO血型鉴定不规则抗体筛选玻片法（正定型）试管法（正定型,反定型）盐水法聚凝胺法抗人球法微柱凝集试验技术达亚美微量定型系统凝胶测试法基于生物化学凝胶过滤技术和

7、离心技术及免疫化学抗原抗体特异反应。当抗原抗体反应，抗人球试验时血细胞发生凝集。离心时凝集块不能通过凝胶间隙而在凝胶上层，呈阳性反应，未凝集细胞离心时可通过凝胶间隙而在凝胶底部，呈阴性反应。DiaMed卡法结果判读4＋在凝胶柱顶端形成单一层凝集细胞。3＋凝集层主要位于凝胶柱上1/3。2＋凝集位于整个凝胶柱，底部仅有较少细胞。1＋凝集层位于凝胶柱下1/3。凝胶中细胞没有凝集或溶血视为阴性。思考题1.红细胞ABO血型鉴定正反定型不一致原因2.导致Rh血型鉴定出现假阳性和假阴性原因3.抗体筛选的临床意义交叉配血CrossMatch目的掌握交叉配血的试验方法原理

8、盐水法检查供受者之间有无ABO血型不合。用于抗体筛选阴性和不同血型骨髓移植患者的