设计-秦皮中香豆素的提取与分离

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《天然药物提取技术》之三医学院闫金红秦皮中香豆素的提取分离与鉴定 香豆素（Coumarin）苦杏仁中苦杏仁苷提取与分离秦皮中香豆素的提取分离与鉴定大黄中游离蒽醌的提取分离与鉴定(4学时)《天然药物提取技术》64学时第3单元单元位置2 单元目标1.能够运用蒸馏法、萃取法和结晶法的操作技术对秦皮中的七叶内酯和七叶苷进行提取分离2.运用薄层色谱法和化学法鉴定七叶内酯和七叶苷1.掌握香豆素与木质素的结构特点与理化性质2.掌握蒸馏法、萃取法和结晶法的操作方法及注意事项3.熟悉荧光实验与异羟肟酸铁实验鉴别七叶苷与七叶内酯的原理4.熟悉薄层色谱的操作流程1.培养学生严谨、认真的工作态度和强烈的责任心2.培养学生的合作能力知识目标能力目标素质目标3 单元设计课程导入检查预习情况（10分钟)任务二秦皮中香豆素类成分的提取分离（90分钟)任务一制定秦皮中七叶内酯和七叶苷的提取分离操作流程（25分钟)单元总结知识梳理（5分钟)任务三七叶苷与七叶内酯的鉴定（50分钟)4 单元导入——10分钟预习任务一：分组查阅并讨论秦皮的来源，性质，有效成分；回顾上单元内容检查预习任务的完成情况主治：清热燥湿、清肝明目、平喘止咳。用于热毒泻痢、目赤肿痛、目生翳障5 预习任务二：秦皮中主要有效成分香豆素的结构、性质、提取分离鉴定方法香豆素提取分离含义结构类型理化性质简单香豆素，呋喃香豆素、吡喃香豆素、异香豆素、双香豆素游离香豆素具有香味，无色或浅黄色结晶，有挥发性，香豆素苷无香味，无挥发性和升华性。游离香豆素可溶于醇和亲脂性溶剂，香豆素苷可溶于醇与水香豆素具有内酯环，在稀碱溶液中水解开环溶于水，加酸环合难溶于水香豆素具有蓝色或紫色荧光，可用于鉴别。7-羟基香豆素蓝色荧光最强，加碱后荧光更强。异羟肟酸铁反应用于鉴别内酯环；三氯化铁鉴别酚羟基，Emerson试剂、重氮化反应用于鉴别酚羟基及对位提取：溶剂提取法、碱溶酸沉法。分离与鉴定：色谱法具有苯并α-吡喃酮基本母核的天然药物的总称性状溶解性与碱反应荧光性显色反应6 任务下发部门：质量部任务接收部门：生产部产品名称：七叶苷、七叶内酯生产数量：1000kg开始时间：2012-05-15结束时间：2012-06-15表一生产任务通知单布置单元任务某制药厂中药提取车间实习，其所在的生产小组接到一个任务，要在一个月内，从秦皮中提取中提取七叶内酯1吨。生产车间——班级生产小组——课堂分组(每组5人，共8组，五名同学担任组长）工艺指导——授课教师7 任务一：制定秦皮中七叶内酯和七叶苷的提取分离操作流程任务二：秦皮中香豆素类成分的提取分离任务三：七叶苷与七叶内酯的鉴定单元任务8 任务一制定提取分离工艺流程——25分钟学生教师涉及理论知识各小组参照任务单，教材，实验指导及预习资料，制定秦皮中香豆素提取分离简单工艺流程。分小组展示工艺流程。修改并掌握秦皮中香豆素提取分离制备工艺流程指导老师结合学生展示进行工艺流程，提问选择提取方法的原因。溶剂提取法、碱溶酸沉法，碱溶酸沉法的原理。9 秦皮粗粉150g乙醇提取液浓缩物水溶液CHCl3水层加适量无水硫酸钠EtOAc萃取液水液七叶苷残留物黄色针晶七叶内酯最佳工艺流程95%EtOH200ml,回流1小时，药渣再重复两次减压蒸馏浓缩至无醇味加蒸馏水40ml,加热溶解，滤过加等体积CHCl3萃取（树脂等脂溶性杂质）挥去CHCl3，用等体积EtOAc萃取三次温热甲醇，浓缩至适量，放置析晶，滤过用甲醇反复结晶10 任务二秦皮中香豆素类成分的提取分离——90分钟学生教师学生易犯错误（1）个人着装等，实验室台面符合要求（2）准备回流装置并检验仪器是否干燥、洁净，若不符合要求，清洗后干燥。（3）称取药材粉末150g（4）量取乙醇200ml观察发现问题，指导。电子天平使用不规范，甲醇量取时视线与刻度线不保持水平操作准备11 学生教师涉及知识学生易犯错误（1）正确安装回流装置：铁架台、固定夹子的安装，冷凝水的调节（2）加热1h与计时正确（3）回流结束的操作顺序正确观察发现问题，指导。提问溶剂的选择原因。香豆素的溶解性（1）进水管与出水管接反（2）先停水再停止加热回流秦皮粗粉12 学生教师学生易犯错误（1）将滤纸叠成4折后，置于漏斗中，滤纸边缘应低于漏斗边缘（2）将圆底烧瓶中溶液倾倒入漏斗中，进行过滤至小锥形瓶中（3）减压蒸馏，浓缩观察发现问题，指导。过滤时做不到三低；使用减压蒸馏装置时水泵与加热的顺序颠倒滤过-浓缩13 学生教师注意事项（1）将浓缩物加入40ml蒸馏水，并加热。（2）加入40ml氯仿，进行萃取，去除树脂等脂溶性杂质。观察发现问题，指导。提问萃取注意事项。萃剂原液互不溶，质溶程度不相同。充分振荡再静置，下放上倒切分明。氯仿萃取14 学生教师学生易犯错误（1）将挥去氯仿的水层加入乙酸乙酯进行萃取。（2）乙酸乙酯萃取液蒸干，加入甲醇重结晶，得黄色针状晶体七叶内酯。（3）水液加入甲醇重结晶，得微黄色针晶七叶苷。监督，强调安全重结晶时加入的甲醇量过多或过少重结晶15 任务三七叶苷与七叶内酯的鉴定——50分钟学生教师知识支撑（1）取七叶内酯与七叶苷的甲醇溶液分别低于滤纸上，在紫外灯下观察荧光的颜色。（2）在原斑点上滴加一滴氢氧化钠观察荧光的变化。观察发现问题，提问学生发生变化的原因香豆素类与碱的反应荧光实验16 学生教师知识支撑（1）取七叶内酯与七叶苷分别置于试管中，加入盐酸羟胺甲醇溶液2~3滴，再加1%的氢氧化钠溶液2~3滴，在水浴中加热数分钟，至反应完全，冷却。（2）再用盐酸调pH3~4,加1%FeCl3试剂1~2滴，溶液变红~紫红色。观察发现问题，提问学生发生变化的原因香豆素类与异羟肟酸铁的反应原理异羟肟酸铁实验17 学生教师知识支撑（1）将样品与对照品分别用毛细血管吸取适量点于硅胶GF254板的适当位置，将板置于色谱缸中。（2）准确量取三氯甲烷-甲醇-甲酸（6:1:0.5)并置于干燥洁净的具塞量筒中混合后，加入色谱缸中进行展开。（3）展开结束时，取出色谱板，标记溶剂前沿，挥干溶剂后，置于紫外灯下观察，记录荧光斑点，得出结论。观察发现问题，提问学生发生此现象的原因。七叶苷与七叶内酯的分子结构，极性。薄层色谱18 内酯环的水解溶解性性状显色反应游离香豆素多为结晶性物质，有一定熔点，多有芳香气味。分子量小的有挥发性，能随水蒸气蒸出，并能升华。香豆素苷多数无香味和挥发性，也不能升华。α、β-不饱和内酯环在稀碱液的条件下，可被水解开环，生成顺邻羟基桂皮酸盐，该盐经酸化即闭环恢复成原来的内酯结构，该性质可用于提取分离。1.内酯的颜色反应（异羟肟酸铁反应）2.酚羟基的颜色反应3.Gibb’s反应4.Emerson反应游离香豆素能溶于沸水，易溶于甲（乙）醇、氯仿、乙醚等，可溶于石油醚。香豆素苷类能溶于水、甲醇、乙醇，而难溶于乙醚、苯等极性小的有机溶剂。荧光性香豆素母核本身无荧光，但羟基香豆素类化合物在紫外光下大多显蓝色或蓝绿色荧光，在碱液中更加显著。香豆素的荧光性质可用于香豆素成分的检识鉴别。色谱检识1.薄层色谱法2.纸色谱法单元总结——知识梳理19 单元总结技能提升薄层色谱萃取重结晶回流减压蒸馏12320 40%成果展示小组合作时每个同学的考核标准2.每个小组的考核标准3.课堂提问的考核？？？过程性考核60%考核与评价单元总结——5分钟21 Thankyouforyourattention!