血沉测定、HCT测定及贫血分类、Ret计数

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1、实验四一、血沉测定二、HCT测定及贫血分类三、Ret计数*四、红细胞平均直径测定一、血沉测定概念红细胞沉降率简称血沉（ESR），指在规定的条件下，离体抗凝全血中的红细胞自然下沉的速率。血沉测定实际上是测量单位时间内红细胞下沉后血浆段的距离。临床意义血沉测定对临床诊断有一定的参考价值，但并无特异性。1、生理性增快：年龄（新生儿偏低，50岁以上FIB↑，ESR↑）；性别（女大于男）；月经期、妊娠3个月以上，FIB↑，ESR↑2、病理性增高：（1）动态观察病情变化（风湿热、结核病活动期或静止期）；（2）良性肿瘤与恶心肿瘤鉴别的参考（良性时多正常，恶性时多增快，晚期或转移明

2、显增快）；（3）功能性病变与器质性病变的鉴别（心绞痛多正常，心肌梗死时增快）3、血沉减慢：真心红细胞增多症、低纤维蛋白原血症、充血性心力衰竭、红细胞形态异常等。影响因素1、RBC本身的因素（大小、形态、HB含量）:大红细胞、红细胞贫血等2、血浆因素：Fbg、CHOL、TG、r-Globulin、a、ß-Globulin均ESR↑。3、药物、病毒、代谢物等均ESR↑4、标本溶血、血沉管倾斜、温度过高5、Albumin、卵磷脂均ESR↓。实验操作过程1、实验器材准备2、试管中加入106mmol/l枸橼酸钠0.4ml3、静脉抽血1.6ml加入试管中，轻轻混匀；4、用血沉管

3、吸取抗凝血至“0”刻度，擦去管外附着的血液，将血沉管直立于血沉架上；5、室温静置1小时，读取血浆段的高度，报告方式：ххmm/h参考值男0－15mm/1h女0－20mm/1hHCT（红细胞比积）又称红细胞压积1、方法：温氏法二、红细胞压积测定及贫血分类2、原理：将定量的抗凝血液置于温氏管中，用一定速度和时间离心沉淀，即得红细胞和血浆的比例，从而得知每升血液中红细胞所占体积的比值（升/升）。HCT主要与红细胞的数量及大小有关，常用于帮助诊断贫血并判断贫血程度，也用于红细胞各项平均值的计算。1根据MCV、MCH、MCHC对贫血分类类型MCV(fl)MCH(pg)MCHC

4、(%)病因大细胞性贫血>100>3432-36巨幼贫等正常细胞性贫血80-10027-3432-36急性失血等小细胞低色素性<80<26<32缺铁贫等贫血单纯小细胞性<80<2632-36慢性感染、贫血中毒等贫血的形态学分类根据MCVRDW的贫血形态学分类MCVRDW贫血类型常见疾病增高正常大细胞均一性贫血再生障碍性贫血增高大细胞非均一性贫血巨幼细胞贫血MDS正常正常正常细胞均一性贫血急性失血性贫血增高正常细胞非均一性贫血再生障碍性贫血减低正常小细胞均一性贫血珠蛋白生成障碍性贫血增高小细胞非均一性贫血缺铁性贫血3、操作：（1）静脉采血2ml，注入EDTA-K23mg

5、（干粉），立即混匀，即为抗凝血；（2）用细长的毛细滴管吸取混匀的抗凝血液，插入温氏管底部，然后将血液慢慢注入至刻度“10”处，注意防止气泡产生。（3）3000转/min离心30分钟（4）读取读数：读取红细胞段高度，以还原红细胞层表面为准，再以3000转/min离心5分钟，如读数不变，表明红细胞已压实，即可按此数值计算HCT；5）HCT＝红细胞段高度的mm数×0.01，即得每升血液中红细胞体积的升数，单位以升/升表示。三、网织红细胞计数一、实验原理网织红细胞胞浆内残存有嗜碱性的RNA物质，经煌焦油蓝或新亚甲蓝活体染色后RNA中负电荷基团与带正电荷的有色基团结合，凝聚成

6、颗粒呈浅蓝或蓝黑色的点状、丝状或网状结构，可在显微镜下识别。计数1000个红细胞中所有的网织红细胞数直接报告其百分比，或×红细胞计数结果报告其绝对值。网织红细胞（Ret）网织红细胞是晚幼红细胞脱核后到成熟红细胞间的过渡细胞，是尚未完全成熟的红细胞，其胞浆内残存有嗜碱性的RNA物质。嗜碱性物质与染料凝聚成蓝色颗粒，颗粒与颗粒连缀成线，线连接成网，故而得名。分型：丝球型、网型、破网型、点粒型。（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型）网织红细胞计数方法1、普通光学显微镜法：活体染色后推片镜检2、网织细胞计数仪法：荧光染色后用流式细胞术计数二、试剂器材1、试剂10g/L煌焦油蓝酒精（水）溶液2

7、、器材毛细血管采血用具、小试管、载玻片、推片、显微镜、香柏油、二甲苯及擦镜纸、Miller窥盘三、操作步骤1.染色：玻片法于载玻片的一端加煌焦油蓝酒精溶液1滴，任其自然晾干后备用，取末梢血或抗凝血一滴，于已干燥的染料上，用推片角混匀后，将两玻片盖合；试管法取染液2滴入试管，加血2滴混匀，封闭好，待15分钟以上时间；2.推片：取混合液1小滴于载玻片的一端，推制成薄而均匀的血膜；3.低倍镜浏览：选取红细胞分布均匀网织红细胞染色较好的部分（体尾交界处），滴香柏油转换至油镜，在Miller窥盘下计数小方格中的RBC数和大方格中的网织红细胞数（或数出整个视野中的RBC总数