微生物学实验3革兰氏染色与细菌个体形态的观察

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1、1.学习革兰氏染色的实验原理与方法2.了解细菌革兰氏染色的应用及意义3.显微观察实验五革兰氏染色法实验目的：一、革兰氏染色法原理1.细菌的细胞壁组成和结构差异G+：壁厚，肽聚糖含量高，类脂质含量低G-：壁薄，肽聚糖含量低，类脂质含量高革兰氏阳性细菌细胞壁革兰氏阴性细菌细胞壁初染媒染复染脱色2.染色（结晶紫）（碘液）（乙醇）（番红）G+：蓝紫色G-：红色革兰氏染色甲菌乙菌媒染碘液脱色乙醇复染沙黄紫色（G＋）初染结晶紫红色（G-）1、制片（1）涂菌：用无菌操作方法从试管中沾取菌液一环，用接种环在洁净无脂的载玻片上做一薄而均匀、直径约1cm的

2、菌膜。（2）干燥：自然干燥或火焰上部略加温加速干燥。（3）固定：将细菌涂片面向上，通过火焰3次。二、操作步骤G+G-???G+:StaphylococcusaureusG-:Escherichiacoli实验策略用铅笔做好标记2、染色(p82-83)滴加结晶紫染液初染1min→水洗滴加卢戈氏碘液媒染1min→水洗滴加95％乙醇脱色，摇动玻片至紫色不再为乙醇脱退为止(约30s)→水洗滴加番红复染1~2min→水洗用滤纸吸干，待镜检。初染媒染脱色复染冲残水吸残水3、显微镜观察（油镜）。1.菌龄：应选择活跃生长期的培养物作革兰氏染色。培养时间

3、过长，或死亡及部分自溶，改变了细菌细胞壁的通透性，造成阳性菌的假阴性反应。2.涂片不宜过厚，以免脱色不完全，造成假阳性。3.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。三、革兰氏染色注意问题及对策G+G-用KOH区分革兰氏染色阴性和阳性细菌*实验原理：G-：壁薄，肽聚糖含量低，类脂质含量高。脂多糖和蛋白质的复合物遇强碱形成粘稠的胶胨状物，可以拉出粘状丝来。G+：壁厚，肽聚糖含量高，类脂质含量低。细胞壁坚固，对强碱无此反应，不能拉出粘状丝来。实验方法：

4、载玻片上滴一小滴3%KOH溶液用接种环接挑取被检细菌于3%KOH溶液中混匀30-60s后观察菌液是否变粘稠，并拉出丝来根据实验结果鉴别G+和G-结　果:1、p841.（1）、（2）：描述(绘)所观察细菌(G+和G-)的个体形态；2、描述KOH试验的结果；思考题1、p842.（3）题2、KOH试验现象直观，可否取代现有染色方法，为什么？四、实验报告操作考核端正坐姿，臂悬空托住瓶底，慢拔塞皿底在上，翻过来悬空倒下，轻晃动平推平板，勿再碰冷却凝固，倒放置写上标记，在皿底下次实验实验六.细菌的鞭毛染色与运动性观察