实验一、油镜的使用和细菌形态观察及革兰氏染色

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1、微生物学实验指导老师：实验要求坚持课前预习不迟到，不早退，更不能无故缺课；严格按正确规范实验方法进行实验，作好记录；保持实验室整洁注意安全事实求是地、独立地写好实验报告实验报告姓名、班级和学号实验题目实验原理（略写）实验操作（（略写）实验结果画图文字描述分析和讨论思考题实验一、显微镜油镜的使用和细菌形态的观察、细菌的革兰氏染色教学目标或要求：巩固和掌握显微镜油镜的正确使用；学习细菌制片和单染色技术；对人体微生物染色检查，初步建立无菌操作的概念。学习细菌的革兰氏染色方法显微镜油镜的使用油镜头的识别和重要参数

2、油镜物镜的工作原理油镜的使用方法和注意事项油镜头的识别和重要参数放大倍数数值孔径工作距离油镜物镜的工作原理使用油质作为玻片与接物镜之间的介质——油浸系可以增加显微镜的放大倍数可以增加视野的照明度可以增大显微镜的分辨率油镜的使用方法和注意事项1、用低倍镜对光。最大光圈2、低倍镜观察（寻找观察目标）。适当缩小光圈3、高倍镜观察（选取理想的观察目标）。4、油镜观察：高倍镜观察后-上升镜筒-油镜转至正下方，在载玻片上加一小滴油-小心地下降镜筒使镜头浸在油里-用粗螺旋将镜筒缓慢上升，寻找目标（物象）用细螺旋调节，使

3、物象清晰-观察记录。最大光圈5、观察完毕。上升镜筒，转动物镜转换器，使油镜物镜偏位。用干净擦镜纸擦去镜头上的油迹，再取一张擦镜纸醮上二甲苯擦去镜头上残留的香柏油，最后再用一张干净的擦镜纸擦去残留在镜头上的二甲苯。6、将显微镜各部分还原，放回箱中。细菌的制片与染色单染色复染色染料①碱性染料（basicdye）—带正电染料。其阳离子部分为发色基团，可与细胞中带负电的组分结合。如结晶紫沙黄,甲基蓝,碱性复红等。②酸性染料（Aciddye）—带负电染料。其阴离子部分为发色基团，可与细胞中带正电的组分结合。如刚果红

4、、酸性复红等。③脂溶性染料—如Sudanblack。多数染料都是中性有机盐。据着色基的不同可分为以下类型：涂片干燥固定染色1~2min水洗、吸干镜检细菌的单染色步骤：结果:阳性菌——紫色阴性菌——红色结晶紫初染碘液媒染乙醇脱色番红复染涂片固定由丹麦医生HansChristianGram于1884年创立。革兰氏染色法（GramStain）革兰氏染色法操作步骤涂片——干燥——固定结晶紫1min——水洗I-KI1min——水洗95%乙醇脱色约10~20s——水洗沙黄或石炭酸复红1min——水洗干燥——镜检革兰氏

5、染色注意事项p45实验内容1、用美蓝对苏云金芽孢杆菌进行单染色，在显微镜油镜下观察形态；2、用混合涂片的方法对大肠杆菌、苏云金芽孢杆菌进行革兰氏染色3、自选材料：用牙签挑取牙垢观察实验报告绘出革兰氏染色后大肠杆菌和苏云金芽孢杆菌的形态图并说明染色结果思考题：你认为那些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？如何使你的染色结果可信？