IHC的四种基本类型

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1、IHC，是免疫组织化学（Immunohistochemistry）的简称，是以免疫学的抗原-抗体反应为理论基础，用标记的特异性抗体（抗原），对组织内的相应抗原（抗体）进行定位、定性和半定量检测，经组织化学显色反应，利用光镜、荧光显微镜或电子显微镜进行实验结果观察的一项技术。若该技术主要用于研究和观察细胞内的某些成分，又可称为ICC，即免疫细胞化学（Immunocytochemistry）。研究对象，所有能作为抗原或者半抗原的物质，如蛋白质、多肽、核酸、酶、激素、磷脂、多糖以及病原体等，都可以成为它的研究对象。其优势在于特异性高，敏感性高，方法步骤统一，形态、功能

2、和代谢密切结合等方面。因此，IHC/ICC已成为临床病理不可或缺的辅助手段，尤其是根据该技术检测结果的表达水平所发展起来的相关“个体化治疗”方案，使免疫组化的质量及质控管理愈来愈受到高度重视。IHC/ICC主要有四种基本类型1传统直接法新型直接法原理传统直接法，将已知的特异性抗体与标记物结合，制备成标记抗体，再用标记抗体直接与标本内的相应抗原结合，光镜下观察抗原存在部位呈现特异性标记。新型直接法，采用一种具有惰性的多聚化合物（葡聚糖）为骨架，将特异性抗体和HRP结合在骨架上，形成HRP-葡聚糖-特异性抗体的巨大复合物，其内的特异性抗体直接与标本内的相应抗原结合，

3、经酶促反应，即可在光镜下观察特异性阳性结果，也叫多聚螯合物酶法——EPOS法（EnhancedPolymerOne-stepStainning）。优点传统直接法，特异性强，非特异性反应较少，技术操作简便。新型直接法，敏感性极强，背景无染色，大大缩短了试验时间，是目前最简便的免疫组织化学方法，用于冰冻切片作用尤为突出。缺点传统直接法必须标记每一种特异性抗体，且只能检测一种抗原，敏感性较差，同时反应的信号也较小，特别是对于组织或细胞内微量的抗原检测。新型直接法商品化的EPOS品种不多，试剂价格较昂贵。2传统直接法新型直接法原理传统间接法是用未标记的一抗与标本内的相应

4、的抗原物质结合，用标记的二抗与一抗结合，通过荧光显微镜观察，或经过酶促反应后利用光镜观察有色的阳性反应产物。新型间接法是将标本内的抗原与一抗结合后，标记有多聚化合物酶复合物的二抗与一抗结合，经酶促反应进行显色定位，也叫EnVision法。注：EnVision复合物是由二抗分子的一个Fab段与HRP/ALP通过聚合技术结合在线状的葡聚糖上而形成。优点传统间接法一个一抗可以结合多个二抗抗体分子，增强了免疫反应信号，敏感性比直接法增大3-4倍；一抗使用浓度较直接法低；不用直接标记一抗，标记的二抗可以用于多种一抗。新型间接法每一分子的EnVision复合物中约含有70个

5、酶分子和10个二抗分子，具有高度的方法作用，也增加了与一抗分子的结合机会；机体内不存在这种葡聚物，背景非常干净；染色步骤分为两步，操作简便省时。缺点传统间接法特异性低于直接法，容易出现非特异性染色；染色步骤较多，染色所需时间延长。新型间接法是目前最优化的方法。3酶桥法PAP法原理酶桥法是制备同种属的特异性一抗和抗酶抗体（三抗），利用二抗作为桥梁将三抗与一抗连接起来，三抗的标记酶经酶促反应，即可在抗原位置上呈现有色阳性反应产物。PAP法则是借助二抗的桥梁作用，将PAP/ALP复合物连接在与组织抗原结合的一抗上。PAP复合物由3分子酶和2分子的抗酶抗体构成，抗酶抗体

6、和一抗为同种属动物的IgG，经相应的酶促反应，可通过显微镜观察到阳性结果。优点酶桥法3种抗体均被酶标记，酶是通过免疫学原理被标记在三抗上，避免了因化学方式结合对抗体和酶活性的损害，提高了方法的敏感性，节省了一抗的用量。PAP法抗体活性高，灵敏度高，背景染色低。缺点酶桥法标记的酶类很难被精确的稀释到恰当的浓度，以达到和三抗的抗酶部位全部结合，同时也难以彻底洗脱掉与标本中其他成分非特异性结合的酶，造成较高的非特异性染色。PAP法染色步骤较多，需要的染色时间长。4ABC法SP法原理ABC法即抗生物素-生物素-过氧化物酶法，它的关键是ABC复合物，由一个卵白素分子结合3

7、个生物素化的过氧化物酶分子构成。卵白素作为“桥”连接在生物素标记的过氧化物酶与生物素标记的抗体之间，于是形成一个含有3个以上过氧化物酶分子的网格状复合物，通过ABC复合物中卵白素与生物素化抗体结合，经过组织化学的酶显色反应，达到检测组织或细胞原位内抗原的目的。SP法即链霉抗生物素-生物素法，与ABC法相似，不同的是链霉抗生物素蛋白与生物素化酶（HRP）结合，形成链霉抗生物素-生物素化酶复合物，这种复合物再与生物素标记的二抗结合，通过酶的显色反应检测抗原存在的部位。优点ABC法敏感性高（相对于PAP法），特异性强，尤其适用于单克隆抗体，组织背景染色浅，操作方法简便

8、，节省染色时间。SP法相