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时间:2019-07-18
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1、第四章培养基的制作第一节母种培养基制作第二节原种、栽培种培养基制作第三节液体菌种制作技术教学目的:熟练掌握各级培养基的制作方法。教学重点:培养基的制作方法。第一节 母种培养基的制作一、菌种培养基(一)按营养物质种类分类l.天然培养基常用的生物材料有马铃薯、胡萝卜、蚕蛹粉、豆芽汁、花生饼粉、玉米粉、酵母等。适合于各类微生物的生长2.合成培养基是指用已知成分和数量的化合物配制而成的培养基。适用研究3.半合成培养基利用天然物质作为碳、氮源及维生素的来源另加一些无机盐类配制而成(二)按培养基的物理状态分类1.液体培养基不加琼脂,多用于生理生化方面研究,培养液体菌种等。2.固体培养基
2、凝固剂的量,琼脂冬季为1.5%--2.0%,夏季2.2%--2.3%。3.半固体培养基含有较少量琼脂(0.2%--0.5%)的培养基,使培养基未达到固态而呈粘稠状态。二、母种培养基配方:1.土豆200g、糖20g、琼脂18g、水1000ml2.去皮马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂18-20g、水1000ml、PH值自然,另外添加:麸皮20g、玉米面5g、黄豆粉5g、磷酸二氢钾2g,硫酸镁2g,VB11片(10mg)。此配方适用于大多数菌种,金针菇、黑木耳、灵芝生长尤其茁壮。可作黑木耳复壮培养基。3.去皮马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂18-20g、水1000ml、PH值
3、自然,另外添加:麸皮20g、玉米面5g、黄豆粉5g、磷酸二氢钾2g,硫酸镁2g,VB11片(10mL),平菇子实体100g。此配方适用于大多数菌种生长。做平菇的复壮培养基效果显著。4.去皮马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂18-20g、水1000ml、PH值自然,另外添加:麸皮20g、玉米面5g、黄豆粉5g、磷酸二氢钾2g,硫酸镁2g,VB11片(10mg)1片,香菇子实体100g。此配方适用于大多数菌种生长,可做香菇的复壮培养基,效果显著。(一)营养液制作1.准备工作三、制作方法2.称量、材料预处理按配方准确称量各营养物质。将马铃薯去皮、挖掉芽眼后称量200g,切成1cm
4、见方的小块。琼脂剪碎后用水浸泡。3.熬煮将切好的马铃薯块加适量水后放入电饭锅中,煮至酥而不烂。4.过滤、加可溶药物用双层沙布过滤,取滤汁,放在电饭锅中加入糖5.熬琼脂、定容在沸腾状态下加入琼脂,直到琼脂完全溶化为止,定容至1000ml。(二)营养液分装1.用注射器分装2.分装标准:分装量为试管长度的1/4—1/5。注意培养基不能沾污试管口。3.塞棉塞棉塞松紧适度,1/3在管外,2/3在管内。4.扎捆7-10支试管捆在一起,棉塞上包好防水纸,直立放入高压灭菌锅中。(四)摆斜面灭菌结束后锅盖开1/5的小缝,用余热烘干报纸和棉塞,然后摆斜面。斜面长是试管总长的1/2(三)灭菌处理
5、在1.0—1.5kg/cm2压力下维持20--30min。(四)摆斜面灭菌结束后锅盖开1/5的小缝,用余热烘干报纸和棉塞,然后摆斜面。斜面长是试管总长的1/2第二节原种、栽培种培养基制作一、常见原种配方①木屑培养基配方细木屑80%,麸皮12%,玉米面1%,黄豆粉2%,过磷酸钙1.5%,红糖0.5%,尿素0.4%,硫酸镁0.1%,石灰1%,石膏2%,料:水=1:1.0-1.2。此配方适合香菇、黑木耳、平菇原种生长,菌丝粗壮洁白。②玉米芯培养基配方玉米芯80%,麸皮14%,糖0.5%,过磷酸钙1%,石灰2%,尿素0.5%,玉米面2%,料:水=1:1.4-1.5。此配方适合于培养
6、平菇原种,菌丝生长速度快,且菌丝粗状。③玉米芯、木屑混合培养基配方玉米芯42%,木屑20%,豆秸20%,麸皮10%,过磷酸钙1.5%,石灰2%,石膏1%,糖0.5%,玉米面3%,料:水1=1:1.4-1.5。此配方适合于培养平菇原种。生长健壮,也可培养金针菇,滑子蘑原种。④软质木屑配方椴木屑75%(木线厂下脚料,颗粒较大),麸皮15%,玉米面5%,石膏1.5%,石灰1%,糖0.5%,过磷酸钙1.5%,尿素0.5%,料,水=1:1.2左右。适用于金针菇,滑子蘑等分解基质能力较弱的品种使用。⑤麦粒、木屑培养基配方新鲜、优质小麦80%,阔叶树木屑20%,木屑:水=1:1左右,拌木
7、屑用煮小麦水,或在此基础上,加入总量0.5%的过磷酸钙,0.5%的蔗糖,1%的石灰,在麦粒煮好后连同木屑拌入。⑥玉米粒培养基配方优质新鲜玉米100%,或后期加入0.5%过磷酸钙,0.5%的糖,1%的石灰。玉米粒培养基制作的原种,具备麦粒原种的优点,后劲更足,接种扩繁量更大。二、原种培养基的制作方法一、谷粒培养基制作1.按配方称量各营养物质配方一:优质新鲜小麦65%,木屑15%,棉籽壳15%,麸皮5%,石膏1%,过磷酸钙0.5%,糖0.5%,尿素0.5%2.谷粒浸泡吸水冬季浸泡24-48小时,夏季加1%石灰(以防变酸
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