《培养基的灭菌》PPT课件

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1、第五章培养基及设备的灭菌第一节培养基灭菌的目的、要求和方法第二节湿热灭菌的理论基础第三节培养基灭菌的工程设计培养基灭菌的要求和方法1，培养基灭菌的定义是指从培养基中杀灭有生活能力的细菌营养体及其孢子，或从中将其除去。工业规模的液体培养基灭菌，杀灭杂菌比除去杂菌更为常用。2，灭菌与消毒的区别灭菌：用物理或化学方法杀死或除去环境中所有微生物，包括营养细胞、细菌芽孢和孢子消毒：用物理或化学方法杀死物料、容器、器皿内外的病源微生物。在发酵过程中夹杂其它杂菌造成的后果：生产菌和杂菌同时生长，生产菌丧失生产能力

2、；在连续发酵过程中，杂菌的生长速度有时会比生产菌生长得更快，结果使发酵罐中以杂菌为主；杂菌及其产生的物质，使提取精制发生困难杂菌会降解目的产物；杂菌会污染最终产品，杂菌会污染最终产品；发酵时如污染噬菌体，可使生产菌发生溶菌现象。培养基灭菌的要求和方法培养基灭菌的目的、要求和方法工业上具体措施1）使用的培养基和设备须经灭菌；2）好氧培养中使用的空气应经除菌处理；3）设备应严密，发酵罐维持正压环境；4）培养过程中加入的物料应经过灭菌；5）使用无污染的纯粹种子。培养基灭菌的目的、要求和方法培养基灭菌的要求

3、达到要求的无菌程度（10-3）尽量减少营养成分的破坏，在灭菌过程中，培养基组分的破坏，是由两个基本类型的反应引起的：培养基中不同营养成分间的相互作用；对热不稳定的组分如氨基酸和维生素等的分解。主要灭菌方法灭菌的方法化学法化学药品灭菌法物理法干热灭菌法热灭菌法射线灭菌法主要灭菌方法干热灭菌法：将金属制品或清洁玻璃器皿放入电热烘箱内，在150～170℃下维持1～2h后，即可达到彻底灭菌的目的。在这种条件下，可使细胞膜破坏、蛋白质变性、原生质干燥，以及各种细胞成分发生氧化。灼烧：是一种最彻底的干热灭菌方法

4、，但它只能用于接种环、接种针等少数对象的灭菌。主要灭菌方法湿热灭菌法，多数细菌和真菌的营养细胞在60℃左右处理5～10min后即可杀死；酵母菌和真菌的孢子用80℃以上的温度处理才能杀死；而细菌的芽孢一般要在120℃下处理15min才能杀死。巴氏消毒法（pasteurization）：目的是杀死其中无芽孢的病原菌（如牛奶中的结核杆菌或沙门氏菌），而又不影响它们的风味。巴氏消毒法是一种低温消毒法.主要灭菌方法低温维持法：在63℃下保持30分钟可进行牛奶消毒；间歇灭菌法：适用于不耐热培养基的灭菌。待灭菌的

5、培养基在80～100℃下蒸煮15～60分钟，以杀死所有营养细胞，然后置室温或37℃下保温过夜，诱导残留的芽孢发芽，再以同法蒸煮和保温过夜，如此连续重复3天，即可在较低温度下达到彻底灭菌的效果。主要灭菌方法常规加压灭菌法：盛有适量水的加压蒸汽灭菌锅加热煮沸，彻底驱尽后将锅密闭，再继续加热至121℃（压力为1kg／cm2或15磅／英寸2），时间维持15～20分钟，也可采用在较低的温度（115℃，即0.7kg／cm2或10磅／英寸2）下维持35分钟的方法。适合于一切微生物学实验室、医疗保健机构或发酵工厂中

6、对培养基及多种器材、物料的灭菌。连续加压灭菌法：在发酵行业里也称“连消法”。此法只在大规模的发酵工厂中作培养基灭菌用。将培养基在发酵罐外连续不断地进行加热、维持和冷却，然后才进入发酵罐。培养基一般在135～140℃下处理5～15秒钟。主要灭菌方法高温对培养基成分的影响：主要灭菌方法消除高温有害影响的措施采用特殊加热灭菌法；含易破坏成分的培养基应与其他成分分别灭菌后再合并，或者进行低压灭菌；对含Ca2+或Fe3+的培养基与磷酸盐先分别灭菌，再混合，避免产生磷酸盐沉淀。主要灭菌方法湿热灭菌的原理每一种微

7、生物都有一定的最适生长温度范围。当微生物处于最低温度以下时，代谢作用几乎停止而处于休眠状态。当温度超过最高限度时，微生物细胞中的原生质胶体和酶起了不可逆的凝固变性，使微生物在很短时间内死亡，加热灭菌即是根据微生物这一特性而进行的。主要灭菌方法湿热灭菌相关定义杀死微生物的极限温度称为致死温度。在致死温度下，杀死全部微生物所需的时间称为致死时间；在致死温度以上，温度愈高，致死时间愈短。微生物的热阻：是指微生物在某一特定条件（主要是温度和加热方式）下的致死时间。相对热阻是指某一微生物在某条件下的致死时间与

8、另一微生物在相同条件下的致死时间的比值。主要灭菌方法各种微生物对湿热的相对热阻微生物相对热阻营养细胞和酵母1.0细菌芽孢3×106霉菌孢子2~10病毒和噬菌体1~5主要灭菌方法培养基成分对灭菌的影响油脂，糖类及一定浓度的蛋白质可增加微生物的耐热性，另一些物质，如高浓度的盐类，色素等可削弱其耐热性。培养基的物理状态对灭菌的影响培养基中微生物数量对灭菌的影响培养基中氢离子浓度对灭菌的影响培养基中氢离子浓度直接影响灭菌的效果。培养基的酸碱度越大，所需杀灭微生物的温度越低。主