粪菌移植对炎症性肠病大鼠血清tnfα、il8的影响

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1、研究生：蔡景融导师：武华教授2015年4月粪菌移植对炎症性肠病大鼠血清TNF-α、IL8的影响专业：普通外科研究方案研究基础研究计划及预算国内外研究进展选题依据Content粪菌移植对溃疡性结肠炎大鼠血清TNF-α、IL8的影响选题依据溃疡性结肠炎(UC)是一种病因和患病机制还未完全阐明，可能与微生态环境、黏膜的免疫应答、应激、遗传等因素有关的慢性肠道炎症性疾病，病变主要局限于结直肠粘膜及粘膜下层，可累及整个结肠甚至末端回肠。目前研究发现，与健康人相比，UC患者肠道中微生物的多样性减少约1/4，拟杆菌门与厚壁菌

2、门在总菌群中所占比例明显减少，而放线菌门与变形菌门的比例明显增加。肠道菌群是机体一个特殊器官，其调节机体免疫、调控炎症、参与物质代谢等方面发挥重要作用。选题依据粪菌移植（fecalmicrobiotatransplantation，FMT），是将健康人粪便中的功能菌群移植到菌群分布异常的患者胃肠道内，重建其健康的菌群分布结构，实现肠道及肠道外疾病恢复的一种治疗方式。现阶段，FMT研究大部分是关于FMT治疗复发性难辨梭状芽孢杆菌感染（CDI）和炎症性肠病（IBD）的个案或系列病例报道,但FMT导致患者肠道菌群具体

3、发生何种有益变化及其潜在的机制仍不完全清楚，但有待进一步研究。对常规治疗失败或有手术禁忌证的UC病人，FMT或许是不错的选择。肠道菌群的生理作用1.防御病原体的侵犯2.物质代谢作用3.生长与衰老4.合成维生素5.肠道的生物、免疫屏障作用选题依据传统的升阶治疗方案，序贯地应用5-氨基水杨酸、糖皮质激素与免疫抑制剂，无疑最为安全易行、经济实用；然而无限期地等待疗效，可能错失治疗良机，延误缓解时间，使约50％患者仍处于活动状态，导致失用或致残的并发症，其疗效费用比反而降低。随着新药问世后治疗经验的积累，专家们提出早期

4、、强力治疗，即降阶治疗方案。这种看似昂贵、危险，实则经济、高效的治疗方法已使相当多的IBD患者获益，但降阶治疗药物昂贵，又有一定风险，如严重感染、药物反应等，对非选择性病例也存在过度治疗之嫌，而且停药或减药后病情仍会发复发作，并表现出一定的激素依赖性。对常规治疗失败或有手术禁忌证的UC病人，FMT或许是不错的选择。目前FMT应用最为广泛的是治疗复发性难治性难辨梭状芽胞杆菌感染(CDI)肠炎，其短期缓解率可达90％以上。FMT也在其他多种疾病中被用于试验性治疗，都取得了良好的效果，如IBD、IBS、肥胖、代谢综合

5、征、糖尿病等。还有FMT被成功运用于系统性硬化病、帕金森病、慢性疲劳综合征和特发性血小板减少性紫癜等的个案报道。国内外研究进展1检测指标及意义3实验方案2创新之处及可行性分析4研究方案研究目标和内容研究目标和内容1溃疡性性结肠炎大鼠模型建模成功评判标准研究内容拟解决的关键问题123研究目标粪菌移植对溃疡性结肠炎大鼠血清TNF-α、IL-8的影响实验分组、建立溃疡性结肠炎的大鼠模型粪菌液的制备指标检测、Chiu氏6级评分法评估损伤程度（1）分组情况（2）模型建立（3）粪菌液的制备（4）指标检测（5）Chiu氏6级

6、评分法评估损伤程度（6）统计学分析2实验方案2.1分组情况健康SD大鼠54只，雌雄各半，体重200-250g，由山西医科大学生理实验室提供。随机分成3组：空白对照组(A组)、模型对照组（B组）、粪菌液模型组（C组），每组18只。其中A组为正常大鼠，给予无菌生理盐水保留灌肠，每天一次，自由饮水、进食。B、C两组为溃疡性结肠炎模型大鼠，分别给予无菌生理盐水、粪菌液保留灌肠，每天一次，自由饮水、进食。（生理盐水量、粪菌液量按体重换算）2.2模型建立大鼠造模前1d禁食24h，不禁水，称重后，3％的戊巴比妥（1ml/kg

7、）腹腔注射麻醉，5％2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBSW/V)按100mg/kg加入等体积50%乙醇溶液；体位为头朝下，用聚丙烯管插入肛门上段8cm，注射器注人。再倒立1～5min左右，以防药液溢出，一次性灌肠。2.3粪菌液的制备粪菌液制备流程：①将约5g供体（A组）新鲜粪便样本置于搅拌器中，加入25mL无菌0．9％NaCl溶液进行初步均质加工；②将粪便浆体经不锈钢滤网过滤去除其中的大颗粒物质；③2h内将样本在氮气生物工程厨内进行称重并在匀浆器中进一步匀质处理；④浆体逐级经过直径2浆体逐级经过直径2．0mm、1

8、．0mm、0．5mm和0．25mm的不锈钢滤网过滤以去除未吸收的食物残渣和小颗粒物质；⑤将再次过滤的样本以6000转/min的速率离心15min，并将沉淀再悬浮于0．9％NaCl溶液中，得几乎无色无味的粪菌液。获得的新鲜粪菌液可立即进行移植，也可加入无菌甘油后置于一80℃作为冰冻样本保存1～8周。2.4指标检测2.5Chiu氏6级评分法评估损伤程度分别于造模后3d、7d、11d每组各取