真菌感染与实验室诊断进展李若瑜

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1、全国基层医疗机构抗菌药物合理应用培训项目常见病原真菌李若瑜北京大学第一医院北京大学真菌和真菌病研究中心真菌感染的分类——根据真菌侵犯人体的部位分为四类：浅表真菌病皮肤真菌病皮下组织真菌病系统性真菌病浅部真菌病深部真菌病临床常见的真菌病——浅表真菌病：花斑癣掌黑癣毛结节菌病皮肤真菌病：皮肤癣菌病—手足、体股、头、甲皮肤念珠菌病皮下真菌病：孢子丝菌病着色芽生菌病暗色丝孢霉病足菌肿系统性真菌病：念珠菌病曲霉病隐球菌病接合菌病双相真菌感染浅部真菌病限于皮肤最外层，甲板、毛发和粘膜的感染。主要的感染是皮肤癣菌病和浅表念珠菌病。大多轻微，容易诊断，对治疗反应良好。手、足、甲癣—最

2、常见的真菌病各种头癣：传染、危害健康皮下真菌病—往往经过外伤发病孢子丝菌病着色芽生菌病系统性真菌病常起源于肺，可以播散到全身许多器官。常通过吸入致病菌孢子而获得，其致病菌腐生于土壤或腐败有机物中，或作为植物致病菌。病原体可分为两组：真正的致病菌和条件致病菌。系统性真菌病—危及生命系统性真菌病主要的致病真菌荚膜组织胞浆菌粗球孢子菌皮炎芽生菌巴西副球孢子菌临床常见的条件性真菌感染念珠菌病:最常见，血源感染的第4位。曲霉菌病:常见于干细胞移植、实体器官移植、大剂量化疗患者。隐球菌病:艾滋病人患病率为10-20%。接合菌病（毛霉病）:多见于重症糖尿病、烧伤病及器官移植病人。临床

3、有增多趋势的条件性真菌非白念念珠菌感染毛孢子菌感染地霉感染镰刀菌感染枝顶孢霉感染暗色真菌感染马尔尼菲青霉真菌感染的诊断方法真菌镜检真菌培养组织病理生理生化血清学方法分子生物学真菌感染的实验诊断方法及问题显微镜检查-阳性率？培养-时间？敏感性？意义？血清学-敏感性？特异性？分子生物学-标准化？组织病理学阿申蓝染色H&EPAS组织学特点Immunochemistry皮肤隐球菌病的组织病理学菌丝孢子曲霉病的组织病理学Prof.RicharddCalderone’slecture-2006,Beijing念珠菌病-直接镜检隐球菌病—直接镜检曲霉病——曲霉头曲霉病双分支菌丝曲霉病

4、——直接镜检双分支菌丝曲霉头接合菌（毛霉）病—直接镜检粗大无分隔菌丝各种培养法—病原真菌鉴定的基本流程临床标本PDA,SDA28度培养不能生长鼻孢子菌、肺孢子菌、马拉色菌（厚皮除外）芽孢关节孢子念珠菌、隐球菌、红酵母等毛孢子菌、地霉等有隔菌丝无隔菌丝担子菌、子囊菌、半知菌接合菌等常见病原真菌酵母及酵母样真菌_念珠菌_隐球菌_毛孢子菌_马拉色菌霉菌(丝状真菌)_皮肤癣菌_曲霉_毛霉_镰刀菌等双相真菌念珠菌属简介念珠菌大约有150个种，65%以上不能在37℃生长，无致病性念珠菌属可以感染皮肤、粘膜及内脏器官引起念珠菌病常见的致病性念珠菌白念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌、光

5、滑念珠菌、克柔念珠菌、季也蒙念珠菌、乳酒念珠菌临床最常见的是白念珠菌生物学特性念珠菌在环境中和人体内均可寄生存在正常人皮肤、口腔、肠道、肛门、阴道中可分离出本菌显微镜下表现为芽孢和假菌丝假菌丝一般与致病相关寄生时一般表现为孢子相致病性条件致病菌白念珠菌致病力强念珠菌毒素、菌体形态、黏附性和分泌水解酶与其致病性密切相关常见病原菌白念珠菌（Candidaalbicans）热带念珠菌（C.tropicalis）克柔念珠菌（C.krusei）近平滑念珠菌（C.parapsilosis)光滑念珠菌(C.glabrata)乳酒念珠菌（C.kefyr）季也蒙念珠菌（C.guillie

6、rmondii）实验室检查直接镜检：可见卵园形发芽孢子及菌丝，如查到大量假菌丝，说明念珠菌处于致病状态。染色：革兰氏染色，菌丝、芽孢呈蓝色，着色不均匀。过碘酸染色，菌丝、芽孢染成红色。用1:1000吖啶橙染色，在荧光显微镜下，菌体呈现荧光。培养：最常用的培养基是沙堡氏培基，当菌落生长后再移种至米粉吐温80培基或其它鉴定培养基中，以便进一步鉴定菌种。念珠菌直接镜检（LPCB）假菌丝和芽孢致病性酵母菌鉴定原则鉴定目的：确定感染及传染源；选择敏感抗真菌药物；哪些酵母菌需要鉴定到种：所有分离自无菌体液，包括脑脊液、血液、尿液、穿刺液及其它体液的酵母菌；分离自所有严重疾患或免疫受

7、损病人或怀疑真菌感染的病人的酵母菌；从任何临床标本中分离出大量的酵母菌；分自若干连续取材的标本，除呼吸道分泌物，也应鉴定至种的水平；芽管试验（Germ-tubetest）原理：白念珠菌在有营养的液体环境中35℃培养，可从酵母细胞生出芽管。结果：白念珠菌可在2h内生成芽管，热带念珠菌和其他念珠菌则否。厚膜孢子形成试验（Dalmoplatetest）念珠菌显色培养基CHROMagarCandidaAPI—20C酵母鉴定系统ID32C酵母鉴定系统VITEK全自动微生物鉴定仪YBC酵母菌鉴定卡。有30个孔的一次性塑料卡，包括26个常规生化反应和4