《真菌李若瑜》PPT课件

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1、真菌感染诊疗进展北京大学第一医院北京大学真菌和真菌病研究中心李若瑜2005年12月13日真菌感染的流行特点+600%+300%+300%Martinetal,NEJM2003;348:1546真菌感染不断增加的现状——78798081828384858687888990919202468Aspergillusspp.Candidaspp.AllotherPrevalenceatAutopsy[%]Grolletal,JInfect1996;33:23-32.经尸检证实的侵袭性真菌感染国内侵袭性真菌感染的发病情况——协和医院感染科刘正印等，中华医学杂志2003年3月第83卷第5期54.84%12

2、.9%3.23%9.68%19.35%国内西南医院尸解资料，(1971-2000)，郝飞教授提供AspergillusCryptococcusMucorCandidaAllothersAIDSIntravascularDevicesOncologyPatientsTransplantPatientsSpectrumAntibiotics真菌感染不断增加的原因—Candida条件致病菌Aspergillus机会来了！临床常见的条件性真菌感染念珠菌病:最常见，占血源感染的第4位。非粒缺病人,SICU常见(肾衰、插管）。曲霉菌病:血液系统恶性肿瘤病人发病可达30%，BMT常见合并症。隐球菌病:在艾滋

3、病人发病率为10-20%。接合菌病（毛霉病）:多见于重症糖尿病和烧伤、器官移植病人。临床有增多趋势的条件致病性真菌非白念念珠菌感染(近平滑、光滑增加)毛孢子菌感染地霉感染镰刀菌感染枝顶孢霉感染暗色真菌感染马内菲青霉病系统性真菌感染的现状—危及生命的机会性、侵袭性感染不断增加，以念珠菌和曲霉最为常见，其它少见菌感染也在增多；对系统性感染仍然缺乏有效的诊断手段；抗真菌新药在不断增加，仍然不能满足临床需求；预防用药以及经验性药物治疗不断增加，耐药菌株逐渐增加。真菌感染的诊断真菌病诊断感染病学家临床医师真菌学家生产研发者病理学家真菌感染的实验诊断方法及问题显微镜检查-阳性率？培养-时间？敏感性？意义？

4、血清学-敏感性？特异性？分子生物学-标准化？真菌病的非培养诊断——乳胶凝集试验检测新生隐球菌抗原ELISA法检测念珠菌和曲霉抗原β-1,3葡聚糖检测免疫组化、原位杂交技术用于深部真菌病诊断寻找种特异性引物并应用于菌种鉴定——曲霉、外瓶霉、镰刀菌、孢子丝菌等PCR？？稳定、特异问题新生隐球菌乳胶凝集试验检测曲霉GM抗原的ELISA试验GM抗原检测用于侵袭性曲霉病诊断与临床诊断和疗效反应有良好的一致性。检测方法有ELISA、放射免疫分析（RIA）和乳胶凝集试验等。Platelia试剂盒采用ELISA方法，敏感性~80%，特异性>80%。儿童假阳性10%。Cut-off值影响结果—0.5:早期诊断,

5、特异性差;1.5:特异性提高。可动态观察。Dr.MaschmeyerG.in2ndTrendsinMedicalMycology,23-26October2005,Berlin曲霉抗原ELISA检测方法（Platelia试剂盒）48例患者：确诊IA4例，3例阳性；高度怀疑IA13例，8例阳性；可疑IA31例，2例阳性。王，等。临床皮肤科杂志，待发表。灵敏性为64.7%特异性为93.5%假阳性率为6.5%假阴性率为35.3%PCRPCR技术用于诊断种特异-PCR非特异PCR杂交Standart"single""nested"PCR-EIA"Real-time"标本全血血浆血清BAL最低检测范

6、围4-10cfu/ml25-100fgDNA原位杂交目的基因多拷贝基因PCR过筛试验诊断IA每周监测2次—通用引物;确定采用巢式和实时定量;敏感性100%,特异性65%;早于临床症状2天,早于确诊9天;动态观察持续阴性可排除;Dr.MaschmeyerG.in2ndTrendsinMedicalMycology,23-26October2005,Berlin,Germany.PCR扩增ITS及18S区基因片段700bp500bp300bp临床株参考株临床株参考株ITS18SJunZhaoetal.JCM2001NestedPCRinAnimalModels余进，等。中华检验医学杂志，2003种

7、特异引物巢式PCR扩增烟曲霉rRNA基因动物模型中巢式PCR方法检测的灵敏度动物模型（只数）巢式PCR阳性结果（百分比）血培养阳性结果（百分比）侵袭性肺烟曲霉感染小鼠（29）23（79.3%）2（6.9%）烟曲霉血症小鼠（25）19（76%）7（28%）总计（54）42（77.8%）9（16.7%）灵敏度=77.8%余进，等。中华检验医学杂志，2003确诊和拟诊曲霉感染患者的诊断情况编号抗原检测巢