侵袭性肺部真菌感染实验室诊断研究进展

《侵袭性肺部真菌感染实验室诊断研究进展》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、侵袭性肺部真菌感染实验室诊断研究进展【关键词】侵袭性肺部真菌感染;病死率;实验室诊断　随着社会老龄化、抗生素的滥用、激素及免疫抑制剂的长期使用、骨髓及器官移植的广泛开展，侵入性治疗手段的不断增多和获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的流行，侵袭性真菌感染的发病率正在迅速增长,严重地威胁人类的健康与生命安全,已成为住院患者感染及死亡的主要原因之一〔1〕,同时，感染的真菌谱也发生了改变,以往真菌感染常见的白色念珠菌有所下降,而非白色念珠菌及曲霉菌感染呈上升趋势〔2，3〕。其中，侵袭性肺部真菌感染(IPFI)占深部真菌感染的首位，约50%～60%侵犯支气管、肺〔4〕。一些慢性病生存时

2、间的延长,使IPFI的发病率增加,病死率高〔5〕。在临床诊疗实践中，由于IPFI的早期诊断相当困难，治疗时机也存在较大分歧,已成为日益严重的临床问题。　　1基本概念10　　IPFI是指真菌引起的支气管肺部真菌感染,即真菌对气管、支气管和肺部的侵犯,引起气道黏膜炎症和肺部炎症肉芽肿,严重者引起坏死性肺炎,甚至血行播散至其他部位。IPFI分为原发性和继发性两种类型,前者指免疫功能正常、有或无临床症状的肺部真菌感染;后者指伴有宿主因素和(或)免疫功能受损的肺部真菌感染,在临床上较为常见。播散性肺真菌病(disseminatedpulmonarymycosis)：指侵袭性肺真菌病扩

3、散和累及肺外器官，或发生真菌血症，与原发于肺的系统性真菌病(systemicmycosis)大体同义。　　2实验室诊断　　IPFI临床上诊断困难，治疗棘手，危害很大。因此，感染的早期检测与鉴定十分重要。IPFI的真菌学检查主要包括以下几方面：直接涂片染色镜检、真菌培养检查、组织病理学检查、免疫和生化方法检测、分子生物学方法检测、抗真菌药物的药敏试验等。　　2.1直接涂片染色镜检真菌学检查最经典的方法,具有快速、简便的特点。直接显微镜检结果对于荚膜组织胞浆菌病、皮炎芽生菌、粗球孢子菌、卡氏肺孢菌(P.jiroveci)或马尼菲青霉具有确诊意义。如肺组织中见到具有分隔的呈锐角

4、分支的菌丝成分时,则可以首先考虑曲霉感染〔6〕。但痰标本涂片找到条件致病性真菌不能轻易诊断为肺部感染，还应结合其他临床情况才能考虑诊断。因此，直接涂片染色镜检对IPFI的诊断作用有限。而支气管肺泡灌洗液、经纤支镜防污染毛刷或经环甲膜穿刺取出的标本进行直接涂片检查,对早期诊断肺部真菌感染有重要意义。　　2.2真菌培养检查10除了能直接观察到病原菌生长，明确致病菌种外，还可做药敏实验，指导临床合理用药。一般用痰液、支气管肺泡灌洗液、胸腔积液、活检组织、血液标本等作培养。通常血培养分离出念珠菌属、新型隐球菌、组织胞浆菌和镰刀霉菌具有临床意义，但如分离出曲霉属(非土曲霉)和青霉属(

5、非马尼菲青霉)则常无临床意义。支气管肺泡灌洗液、胸腔积液、活检组织标本培养出真菌可作出诊断,并可做菌型鉴定,以利临床的诊断和治疗。痰培养阳性对真菌感染的诊断只有参考价值，不能作为真菌感染的确诊标准。但合格痰液培养新生隐球菌阳性,或发现肺孢子菌包囊、滋养体、囊内小体则有临床意义,因为在气道内很少有隐球菌和肺孢子菌的定植。目前为改进传统培养方法耗时长，敏感性低的缺点，许多学者致力于研究更快速、准确鉴定侵袭性真菌感染的培养方法，并取得了很大的成效。　　2.2.1快速鉴定培养方法〔7〕包括:①吐温酵母肉汤培养基(TYB培养基):利用白色念珠菌在人血清中形成芽管这一特点,30min可

6、判定结果。②特异性酶法:有甲基伞形酮N乙酰βO氨基半乳糖苷(MUAG)Candi试剂盒和Albistrip试剂条3～5min可以检测白色念珠菌。Niimi等〔8〕利用部分真菌具有一种水解酶βN乙酰氨基己糖苷酶活性,用对硝基苯N乙酰βD氨基葡萄糖苷作底物检测此酶。在微量滴定板中进行的这一反应可将白色念珠菌和都柏林念珠菌与其他菌种分离开来。③糖同化实验:使用Rosco诊断试纸条4h可鉴定光滑念珠菌。④吐温80浊度实验:可鉴定致病性念珠菌。10　　2.2.2自动血培养系统〔9〕从血液中分离培养出致病真菌是诊断真菌血症的最可靠方法，由计算机控制的全自动连续检测

7、系统，使血培养方法更简单、快速、准确。主要有3类:①采用光电原理监测的血培养系统:利用微生物代谢过程中产生的CO2，引起pH及氧化还原电位改变，用光电比色法可判断有无微生物生长。包括BacT/Alert系统、Bactec9000系列、vital系统及BioArgos系统，10～15min检测一次培养瓶。②检测培养基导电性和电压为基础的血培养系统:利用微生物繁殖可致培养基导电性或电压变化来判断有无微生物生长，包括Malthusll2L微生物生长分析仪及Sentinel系统，10～15min测试一次培养基导电性。③应用