酶的抑制作用及抑制

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1、失活作用:通过变性作用引起酶活力下降或丧失抑制作用:改变必需基团性质,引起酶活力下降,丧失第一节抑制作用的类型:一、分类:(一)不可逆抑制作用:抑制剂以很牢固的共价键与酶结合，不能用物理方法除去，抑制后酶活力不能恢复•专一性的不可逆抑制剂:•非专一性的不可逆抑制剂:(二)可逆抑制作用:抑制剂以非共价键与酶结合阻遏酶的活性，可以用物理方法除去抑制剂后，酶活力能恢复二、区别方法(一)物理方法:(二)动力学方法:1.酶预先用抑制剂处理后测定酶活力变化情况:2.在测活系统中加入抑制剂,然后加入不同酶量,测定酶活力变化情况:第二节不可逆抑制作用一.非专一性的不可逆抑制作用:1.概念:

2、2.非专一性的不可逆抑制剂酰化试剂:(酸酐,乙酰咪唑,硫代三氟乙酸乙酯,O-甲基异脲)--NH2－NH－CO-RR-CO-X+E---OHE-－O－CO-R+HX--C6H5-OH－C6H5-O－CO-R--SH－S－CO-R烷化试剂:(2.4-二硝基苯氟,碘代乙酸,碘代乙酰胺等)-NH3-NH-R-SH-S-RR-X+E-COOHE－-COOR+HX-S-CH3-S(CH3)-R咪唑基NH-咪唑基N-R含有活泼双键试剂:(N-乙基顺丁烯二酸抱亚胺(NEMI)、丙烯腈等OONH2NHN-CH-CH23N-CH2-CH3+EOOOSHSN-CH2-CH3O亲

3、电试剂:(四硝基甲烷(TNM)NO2NO2O2NCNO2+E--OHE--OH+CH(NO2)3氧化剂:H2O2,NBS等NO2作用-SH、Trp、吲哚基等还原剂:ME,DTT等,作用-S-S-、二、专一性不可逆抑制剂:（一）Ks型不可逆抑制剂:1.概念2.抑制机理E+IEIEInE＋IEIEin亲和标记法图解判断Ks型抑制剂作用是否发生在活性部位方法:化学定量法.底物、竞争性抑制剂保护方法酶先可逆失活,再研究KS型抑制情况（二）Kcat型不可逆抑制动力学概念:自杀性底物例如中E.coli中-羟基葵酰硫酯脱水酶CH3-(CH2)6-CH2-CH(OH)-CO

4、-S-RR=-CH2-CH2-NH-CO-CH3CH3-(CH2)6-CH=CH-CO-S-R(-反式双键)CH3(CH2)5-CH=CH-CH2-CO-S-R(,顺式双键)Kcat型抑制剂:3.4-葵炔酰-N-乙酰半胱胺CH3-(CH2)5-CC-CH2-CO-S-RECH3-(CH2)5HC=C=CH-CO-SRNENHCH3(CH2)5HC=C-CH2-CO-SRNN不可逆共价结合第三节可逆抑制作用的动力学:可逆抑制作用:ReversibleInhibition1.概念2.类型:竞争性抑制:Comp.CCompetitiveinhibition非竞争性抑制N

5、onC.NCNon-Competitive反竞争性抑制UnC.UCUn-Competitive混合型抑制MTMixedTypeinhibition一、竞争性抑制作用动力学模型图:竞争性抑制作用动力学方程推导：I+k1k2k2E+SESE+Pk-1k1[S]EESk-1k-3k3k-3k3[I]EIEI酶形式矢量图动力学项Ek-1k-3+k-3k2ESk1k-3[S]EIk-1k3[I]+k2k3[I]vk[ES]kkk[S]02213[E][E]k(kk)kk[S]k(kk)[I]0t31231312k[E][S]V[S]20mv0(kk)k(k

6、k)[I]12312K(1)[S][S][I]mkkkK131I动力学模型:I+Kmk2E+SESE+PKIEI动力学方程：V[S]mv[I]k3[I]K(1)[S]KIKmappKm(1)mk3KKII式中Vm=k2[E]o不变Km为米氏常数Kmapp表观米氏常数，增大KI为抑制常数双倒数作图法：1Km(1[I])11VVmKI[S]Vm1441232.0-1)in1021.5/m18Dm0(OK1.06/v140.520.00.00.30.60.91.2-2.0-1.00.01.02.03.04.0[I](mM)-11/[S](m

7、M)抑制常数：KI的求法：KK[I]KKmImappm(1)m[]KIKI以Kmapp对[I]作图，横轴截距为-KI[I]100%抑制率i%=(1-vi/vo)100%KI(1[S]/Km)[I]i%与[S]有关,[S]i%二、非竞争性抑制作用动力学:II++k2动力学模型:E+SESE+PKIKIEI+SESIVm[S]Vm[S]动力学方程：v[I][I][I]Km[S]Km[S](Km[S])(1)KIKIKIVmapp[S]VmVmapp[I]Km[S](