绿原酸的直接荧光分析法及其抗氧化性研究

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1、第２７卷第２期分析科学学报２０１１年４月Ｖｏｌ．２７Ｎｏ．２ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＡＮＡＬＹＴＩＣＡＬＳＣＩＥＮＣＥＡｐｒ．２０１１文章编号：１００６－６１４４（２０１１）０２－０２０３－０４绿原酸的直接荧光分析法及其抗氧化性研究李满秀＊，张瑶，杨淑英（忻州师范学院化学系，山西忻州０３４０００）摘要：绿原酸水溶液能产生微弱荧光，当加入９５％的乙醇后，其荧光强度大大增强，基于此，建立了直接测定绿原酸的荧光分析新方法。ｐＨ＝１．７２时，在１．４１６～１４．

2、１６／ｍＬ浓度范围内，绿原酸的荧光强度与其浓度呈良好的线性关系，相关系数ｒ为μｇ０．９９６３；检出限为０．０８１μｇ／ｍＬ；相对标准偏差为０．５４％。该方法灵敏度高且稳定性好，已成功用于金银花和杜仲皮中绿原酸的测定。试验还表明，含有绿原酸的金银花和杜仲皮等中草药有良好的抗氧化性。关键词：荧光分析；绿原酸；抗氧化性中图分类号：Ｏ６５７．３９文献标识码：Ａ绿原酸是一种重要的生物活性物质，广泛存在于杜仲、向日葵、金银花、继木、可可树、咖啡等高等双子叶植物和蕨类植物中。绿原酸具有抗菌、抗病毒、增高白血球、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂、清除［１］自由

3、基和兴奋中枢神经系统等作用。它是许多中药材的有效成分之一，也是某些成药的质量指标，主要［２］应用于医药、日用化工和食品等行业。目前，测定绿原酸的分析方法主要有毛细管电泳法、高效液相色［３－４］［５－６］［７］谱法、分光光度法、薄层扫描法等。但这些方法中样品预处理大多采用索氏回流提取，层析分离洗脱等步骤，时间长，效率低。本文提出了一种用超声波提取，不经分离纯化而直接测定绿原酸的荧光分析法，在１．４１６～１４．１６／ｍＬ浓度范围内，绿原酸的荧光强度与其浓度呈良好的线性关系，相关系数ｒ＝０．９９６３；检出限为０．０８１μｇ／ｍＬ；相对标准偏差为０．５

4、４％。该方法灵敏度高且稳定性好，成功地用于金银花和杜仲皮中绿原酸的μｇ测定。对其抗氧化性试验结果表明，含绿原酸的金银花和杜仲皮等中草药有良好的抗氧化性。１实验部分１．１主要仪器和试剂Ｆ－４５００型荧光分光光度计（日本，日立公司）；７２２型可见分光光度计（上海精密科技仪器有限公司）；ｐＨＳ－３Ｃ精密酸度计（上海雷磁仪器厂）。绿原酸标准溶液：准确称取绿原酸标准品（中国药品生物制品检定所）１７．７ｍｇ，用９５％的乙醇溶解，转移到５０ｍＬ容量瓶中，用９５％的乙醇定容至刻度，配成３５４μｇ／ｍＬ的储备液。三酸缓冲溶液：取硼酸０．６１８３ｇ，８５％的磷酸０

5、．６８ｍＬ，３６％的乙酸１．１６ｍＬ，用蒸馏水配成三酸混合液；再取２．０ｇ氢氧化钠，配制成２５０ｍＬ０．２ｍｏｌ／Ｌ溶液，将配好的三酸混合液与氢氧化钠溶液以不同体积混合，可配制为不同ｐＨ的缓冲液。槲皮素（中国预防医学科学院劳卫所），二苯带苦肼基自由基（ＤＰＰＨ·）试药（东京化成工业株式会社），９５％乙醇（天津市化学试剂三厂）。试剂均为分析纯，实验用水为二次蒸馏水。１．２实验方法移取１．０ｍＬ３５４μｇ／ｍＬ的绿原酸溶液于２５ｍＬ比色管中，加入２．０ｍＬ三酸缓冲液（ｐＨ＝１．７２），用收稿日期：２０１０－０５－０７修回日期：２０１０－０９－０２基

6、金项目：山西省高校高新技术产业化项目（Ｎｏ．２０１００２０）＊通讯作者：李满秀，男，教授，主要从事分析化学和天然产物的分离纯化研究．２０３第２期李满秀等：绿原酸的直接荧光分析法及其抗氧化性研究第２７卷９５％的乙醇定容至刻度，充分振荡，室温下，用１ｃｍ荧光池，在激发和发射光谱通带均为５ｎｍ时测其荧光强度。１．３ＤＰＰＨ·法测定不同物质对总自由基的清除作用［８］原理见文献。ＤＰＰＨ·是一个大分子的稳定自由基，预期模式为：ＡＨ＋ＤＰＰＨ·→ＤＰＰＨ—Ｈ＋Ａ·依据ＤＰＰＨ·具有单电子，在５１７ｎｍ波长处具有一强吸收（深紫色），自由基清除剂与其单电子

7、配对使其逐渐消失，其褪色程度与所接受电子数成定量关系，因而可用分光光度法进行定量分析。具体步骤为：取不同浓度被测物２ｍＬ，然后加２ｍＬ２．０×１０－４ｍｏｌ／Ｌ的ＤＰＰＨ·溶液到同一１０ｍＬ比色管中，摇匀，静置３０ｍｉｎ后，以被测物作参比，测定其吸光度Ａ样。同时用无水乙醇作参比，测定２ｍＬ－４２．０×１０ｍｏｌ／Ｌ的ＤＰＰＨ·溶液与２ｍＬ无水乙醇混合液的吸光度值Ａ对，根据下面公式计算清除率：Ａ对－Ａ样（Ａ对照－Ａ参比）－（Ａ样品－Ａ样参）清除率＝×１００％＝×１００％（１）Ａ对Ａ对照－Ａ参比式中，Ａ参比：指加入无水乙醇时的吸光度值。Ａ对照：指加

8、入ＤＰＰＨ·的自由基体系的吸光度值。Ａ样品：指加入不同被测物后的吸光度值。Ａ样参：指加入不同被测物，ＤＰＰＨ·后的自由基体系的吸光度值。２结果讨论２．