《霉菌和酵母计数GB》PPT课件

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1、食品卫生微生物学检验GB/T4789-20031、霉菌和酵母计数2、肉毒梭菌及肉毒毒素检验3、罐头食品商业无菌的检验4、乳酸菌检验一、霉菌和酵母计数1范围2规范性引用文件3设备和材料4培养基和试剂5检验程序6操作步骤霉菌和酵母菌及其检验二、检验方法：霉菌和酵母的计数方法，与菌落总数的测定方法基本相似。主要步骤为：将样品制作成10倍梯度的稀释液，选择3个合适的稀释度，吸取1mL于平皿，倾注培养基后，培养观察，计数。对霉菌的计数，还可以采用显微镜直接镜检计数的方法。霉菌和酵母菌及其检验三、程序:1．样品的处理。为了准确测定霉菌和酵母数，真实反映被检食品的卫生质量

2、，首先应注意样品的代表性。对大的固体食品样品，要用灭菌刀或镊子从不同部位采取试验材料，再混合磨碎。如样品不太大，最好把全部样品放到灭菌均质器杯内搅拌2min。液体或半固体样品可用迅速颠倒容器25次来混匀。2．样品的稀释：为了减少榈稀释倍数的误差，在连续递增稀释时，每一稀释度应更换一根吸管。在稀释过程中，为了使霉菌的孢子充分散开，需用灭菌吸管反复吹吸50次。3．培养基的选择：在霉菌和酵母计数中，主要使用以下几种选择性培养基。马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基（PDA）孟加拉红（虎红）培养基高盐察氏培养基霉菌在孟加拉红培养基上典型特征霉菌在孟加拉红培养基上典型特征为红色

3、菌落，有黑色孢子。酵母菌在孟加拉红培养基上典型特征酵母菌在孟加拉红培养基上典型特征为红色菌落酵母菌在孟加拉红培养基上典型特征为红色菌落霉菌和酵母菌及其检验4．倾注培养。每个样品应选择3个适宜的稀释度，每个稀释度倾注2个平皿。培养基熔化后冷却至45℃，立即倾注并旋转混匀，先向一个方向旋转，再转向相反方向，充分混合均匀。培养基凝固后，把平皿翻过来放温箱培养。大多数霉菌和酵母在25－30℃的情况下生长良好，因此培养温度25~28℃。培养3d后开始观察菌落生长情况，共培养5d观察记录结果。5．菌落计数及报告：选取菌落数10~150之间的平板进行计数。一个稀释度使用两

4、个平板，取两个平板菌落数的平均值，乘以稀释倍数报告。固体检样以g为单位报告，液体检样以mL单位报告。关于稀释倍数的选择可参考细菌菌落总数测定。霉菌和酵母菌及其检验6．霉菌直接镜检计数法：对霉菌计数，可以采用直接镜检的方法进行计数。在显微镜下，霉菌菌丝具有如下特征：平行壁：霉菌菌丝呈管状，多数情况下，整个菌丝的直径是一致的。因此在显微镜下菌丝壁看起来象两条平行的线。这是区别霉菌菌丝和其他纤维时最有用的特征之一。横隔：许多霉菌的菌丝具有横隔，毛霉、根霉等少数霉菌的菌丝没有横隔。菌丝内呈粒状：薄壁、呈管状的菌丝含有原生质，在高倍显微镜下透过细胞壁可见其呈粒状或点状

5、。分枝：如菌丝不太短，则多数呈分枝状，分枝与主干的直径几乎相同，有分枝是鉴定霉功得出可靠的特征之一。肉毒梭菌及肉毒毒素检验肉毒梭菌是厌氧性梭状芽胞杆菌属的一种。该菌在厌氧环境中能分泌极强烈的肉毒毒素，引起特殊的神经中毒症状肉毒毒素通过消化道粘膜吸收，经血液扩散至全身，主要侵犯中枢神经系统，因而表现出一系列的神经症状。主要临床特点：发病初期为无力、腹部不适、咽部发紧、呕吐，继而出现声音嘶哑、饮水发呛、吞咽困难、眼睑下垂、复视等眼部症状。肉毒梭菌及肉毒毒素检验培养基、试剂明胶磷酸盐缓冲液10%胰酶水溶液（酶活力1：250）庖肉培养基卵黄琼脂培养基肉毒分型抗毒诊断

6、血清革兰氏染色肉毒梭菌及肉毒毒素检验样品采集：可疑食物病人血清在未使用抗毒素治疗前采集（4-5ml）病人粪便疑似患者外伤感染后的坏死组织或者是渗出液肉毒梭菌及肉毒毒素检验1增菌（产毒培养）2分离培养3菌落特征及菌体形态4菌落特征及菌体形态5生化试验6肉毒毒素检验（小白鼠腹腔注射）肉毒梭菌及肉毒毒素检验菌落特征及菌体形态普通琼脂平板上形成直径3-5mm不规则菌落、半透明、绒毛样边缘扩散生长血平板上形成发丝状或盘状的灰色菌落有β-溶血卵黄琼脂平板菌落及周围培养基上能分解脂肪表面覆盖着特有的虹彩样薄层和珠光层肉毒梭菌及肉毒毒素检验生化试验肉毒梭菌的生化反应变化很大

7、，同一型各菌株之间也不完全一致。肉毒梭菌及肉毒毒素检验分纯后主要生化鉴定明胶硫化氢硝酸盐葡萄糖麦芽糖乳糖蔗糖++－++—+肉毒毒素检验（小白鼠腹腔注射）标本处理接种量小白鼠数结果上清液+10%胰酶水溶液（9：1）37℃1小时0.5ml4只4h死亡上清液+缓冲液煮沸10分钟0.5ml4只存活庖肉增菌48小时15分钟/2000转，取上清液0.5ml4只4h死亡上清液0.5ml4只6h死亡上清液稀释50倍0.5ml2只16h死亡上清液稀释500倍0.5ml2只20h死亡上清液稀释5000倍0.5ml2只存活明胶磷酸盐缓冲液（对照组）0.5ml2只存活定型试验标本处

8、理（抗毒素1ml+9ml上清液1：201ml）接种量