《蛋白质的测定》PPT课件

《《蛋白质的测定》PPT课件》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、第八章蛋白质的测定一、测定食品中蛋白质含量的意义二、常量凯氏定氮法三、微量凯氏定氮法四、自动凯氏定氮仪五、氨基酸的分析一、概述（一）测定意义1、蛋白质作为三大供能物质，是食品的重要营养指标。2、人体组织的构成成分。3、构成体内各种重要物质4、蛋白质不是越多越好（增加肾负担，骨质疏松）5、不同食品中蛋白质的含量不同，可作为质量检验的一种重要手段。（二）各种食物中蛋白质的含量在各种不同的食品中蛋白质的含量各不相同，一般说来动物性食品的蛋白质含量高于植物性食品例如牛肉中蛋白质含量为20.0%左右，猪肉中为9.5%，兔肉为21%，鸡肉为20%，牛乳为3.5%黄鱼为

2、17.0%，带鱼为18.0%，大豆为40%，稻米为8.5%，面粉为9.9%，菠菜为2.4%，黄瓜为1.0%，桃为0.8%，柑橘为0.9%，苹果为0.4%和油菜为1.5%左右。新型蛋白质类食品单细胞蛋白：螺旋藻螺旋藻植物蛋白质含量最高达70%，相当于牛肉的3倍，包含全部八种人体所需又无法自身合成的氨基酸，是人类最为最理想的蛋白质天然宝库。（三）测定原理凯氏定氮法通过测定食品中N的含量，再乘以蛋白质系数，就可以得到蛋白质的含量=N×6.25=蛋白质含量而一般来说，食品中蛋白质的含氮量为16％，所以，测得的含氮量再乘以6.25，就能得到蛋白质的含量。二、凯氏定氮

3、法（国标法）1、原理样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出，而样品中的有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵。然后加碱蒸馏，使氨蒸出，用硼酸吸收后再以标准盐酸或硫酸溶液滴定。根据标准酸消耗量可计算出蛋白质的含量。化学反应方程式2NaOH＋(NH4)2SO4＝2NH3↑＋Na2SO4＋2H2O2NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO32NH2(CH)2COOH＋13H2SO4＝(NH4)2SO4＋6CO2＋12SO2＋16H2O2、仪器①50

4、0ml凯氏烧瓶②定氮蒸馏装置3、试剂硫酸(密度为1.8419g/L)；硫酸铜(CuSO4.5H2O)；硫酸钾；K2SO440%氢氧化钠；混合指示剂：0.1%甲基红乙醇溶液与0.1%甲基蓝乙醇溶液，临用时按2:1的比例混合。或者0.1%甲基红乙醇溶液与0.1%溴甲酚绿乙醇溶液，临用时按1:5的比例混合；2%硼酸溶液：0.1mol∕L盐酸标准溶液浓H2SO4在消化阶段起决定性作用具有脱水性：使有机物脱水后被炭化为C、H、N具有氧化性：将有机物彻底氧化C+2H2SO4→CO2+2H2O+2SO23SO2+2N+3H2O→2NH3+3SO32NH3+H2SO4→（

5、NH3）2SO4(CuSO4.5H2O)在消化阶段作催化剂，在蒸馏反应时作指示剂。C+2CuSO4→Cu2SO4+SO2+CO2Cu2SO4+H2SO4→2CuSO4+2H2O+SO2有机物被全部消化后，溶液呈清澈的蓝绿色。K2SO4在消化时提高溶液的沸点K2SO4+H2SO4→2KHSO4330℃400℃2KHSO4→K2SO4+SO2+H2O在消化过程中，随着H2SO4的不断分解，水分不断蒸发，K2SO4的浓度逐渐增大，加速了对有机物的分解作用。K2SO4与H2SO4的用量比不宜过大，否则会损失氨。4、操作步骤样品消化蒸馏、吸收滴定（1）消化准确称取固

6、体样品0.2～2.0g，液体10～20ml，置于500ml凯氏烧瓶中。加入硫酸铜0.2g，硫酸钾6g，浓硫酸20ml，摇匀。置于电炉上，成45度角，小火加热。待泡沫停止后，加大火力，保持微沸，至液体变蓝绿色透明，再继续加热0.5～1h，取下冷却后，小心加入20ml水，转移至1000ml容量瓶，定容。（2）蒸馏、吸收按左图连接好装置，塞紧瓶口，冷凝管下端插入吸收瓶下（瓶中有50ml4％硼酸和混合指示剂）。放松夹子，加入70～80ml氢氧化钠溶液，至瓶中溶液变为深蓝色或产生黑色沉淀，再加入100ml蒸馏水，夹紧夹子，加热蒸馏，至氨全部蒸出（250ml）。（3）

7、滴定将上述吸收液用0.1000mol/L盐酸标准溶液直接滴定至蓝色变为微红色即为终点，记录盐酸用量。计算公式W—蛋白质的质量分数，%；c—盐酸标准液的浓度，mol/L；V—试剂滴定消耗标准液量，mL；m—样品质量，g；0.014—氮的毫摩尔质量，g/mmol；F—蛋白质系数，6.25。（4）注意事项消化时间一般约4小时，过长会引起氨的损失。但若赖氨酸或组氨酸含量较多时需要延长时间。样品中脂肪或糖较多时消化时间要长些，还应注意发生的大量泡沫，为防止其溢出瓶外，在开始消化时要小火加热，并不时摇动，必要时甚至可以停止加热半小时。蒸馏装置不能漏气，在蒸馏过程中要注

8、意接头处有无松漏现象，蒸馏完毕后先将吸收瓶脱离冷凝管，继续蒸馏1分