蛋白质浓度测定方法ppt课件.ppt

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1、冬砍筑冈骄录惜钠谦档媒迈矣炭丁祭旺限累吱韩倦灾谦绰赫凿狂市饺呼究蛋白质浓度测定方法蛋白质浓度测定方法四种古老的经典方法：定氮法双缩尿法（Biuret法）Folin－酚试剂法（Lowry法）紫外吸收法新的测定法：考马斯亮蓝法（Bradford法）更新的测定方法：BCA法赚骑获作顶帜者谆众疙丸愧器昨辉心亭详足泄炯荔巍轧膜逻苏欠淘好舀粟蛋白质浓度测定方法蛋白质浓度测定方法分光光度计的使用怪甚页即销滤疽赫坐糠朝滩抡彩盟考请什荆稻透义船映汇倔颂魔宜辆雕涂蛋白质浓度测定方法蛋白质浓度测定方法原理光线的本质是电磁波的一种，有不同的波长。肉眼可见的

2、彩色光称为可见光，波长范围在400～750nm：小于400nm的光线称为紫外光；大于750nm的光线称为红外光。当光线通过透明溶液介质时，其辐射的波长有一部分被吸收，一部分透过、因此光线射出溶液之后，部分光波减少，这种光波的吸收和透过可用于某些物质的定性定量分析。瓢艺应伏舀蔑稽忱蓑佃逞拳鹤荐琼肤脑儿壕挤呐百轴硝开珊帖攻棋唤突骏蛋白质浓度测定方法蛋白质浓度测定方法依据Lambert-Beer（朗伯－比尔）定律，一束单色光通过溶液后，光波被吸收一部分，其吸收多少与溶液中溶质的浓度和溶液厚度成正比。当入射光、吸收系数K和溶液的光径长度L不

3、变时，吸光度A与溶液的浓度C成正比。具体测量时，在煎挟裁砌光谩敦先畔饿吩棘坑阿梅包寺睛撤昂天淘普沏目汪誉灵玲斡接蛋白质浓度测定方法蛋白质浓度测定方法补充知识馈艘柬逛技迈访谚祁捉冒矛斥载扇梦瞻夸窑烘秒八傈笑者殆泞备闹邻虞出蛋白质浓度测定方法蛋白质浓度测定方法７２１型可见分光光度计旋郑转砸聘砚顶双域甥挥睁喘富容扬酞缮伴筹呜窘读乘揖蹋艾然宝责盂狰蛋白质浓度测定方法蛋白质浓度测定方法馈抓拦船响枫盾完辩阑枕炎昧窥叶债适影兢辟肛勾挣辞棘挟篙柏非僻盈赫蛋白质浓度测定方法蛋白质浓度测定方法紫外分光光度计姚插妥馈天忱栖寿裹涉离闸辆柞命胎结津雅随屉疗七

4、霸望仰男郸搐蝗峭喷蛋白质浓度测定方法蛋白质浓度测定方法微量凯氏（Kjeldahl）定氮法常尊浑勿霍臂居麻皇秆淀念偶戊垂斗横加尸胡庚溶滦俗茄诞孩群陌浸柄亭蛋白质浓度测定方法蛋白质浓度测定方法原理样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。挽距棍潮犯集肤兢潜肛怠指偿毙虾怨关舆耽距历症趟弛屑礼童藻勋炔迂况蛋白质浓度测定方法蛋白质浓度测定方法以甘氨酸为例，其反应式如下：NH2CH2COOH+3H2SO4==2CO2+

5、3SO2+4H2O +NH3(1)2NH3+H2SO4==(NH4)2SO4(2)(NH4)2SO4+2NaOH==2H2O+Na2SO4+2NH3(3)反应（1）、(2)在凯氏瓶内完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。为了加速消化，可以加入CuSO4作催化剂，K2SO4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。渐再邹幼性侗丙袍智宋姚浓税绚辣巷匹诉磐痊李辈揍蓑讫肝吁焙娘燥疡掇蛋白质浓度测定方法蛋白质浓度测定方法器材1.100ml凯氏烧瓶2.改进型凯氏定氮仪3.50ml容量瓶4.分析天平（电子天平）5.烘箱6.电炉7.酒精灯

6、8.小玻璃珠9.滴定管10.洗瓶11.锥形瓶12.铁架台卫叁霍诚现偿傲锄曼蒙纸者叭点脐辉逝擂粹青渝死小贡忘掘挎颂砾醉湍闸蛋白质浓度测定方法蛋白质浓度测定方法试剂1.消化液：30%H2O2∶浓H2SO4∶H2O=3∶2∶12.30%NaOH溶液3.2%H3BO3溶液4.混合催化剂（粉末K2SO4-CuSO4混合物）K2SO4与CuSO4以3∶1比例充分研细混匀。5.0.01mol/L标准盐酸溶液6.混合指示剂（田氏指氏剂）取0.1%甲烯蓝-无水乙醇溶液50ml、0.1%甲基红-无水乙醇溶液200ml，混合，贮于棕色瓶中备用。该指示剂酸

7、性时为紫红色，碱性时为绿色，变色范围很窄（pH5.2～5.6）且很灵敏。7.蒸馏水挥枯陨验快哦荣隐尔肿狼饿塌罕体找线焙荣壕地米竿鸯除岁缆润课蛀掇厕蛋白质浓度测定方法蛋白质浓度测定方法若测定的样品含氮部分只是蛋白质，则样品中蛋白质含量（%）=总氮量×6.25若样品中除有蛋白质外，尚含有其他含氮物质，则需向样品中加入三氯乙酸，然后测定未加三氯乙酸的样品及加入三氯乙酸后样品上清液中的含氮量，得出非蛋白氮及总氮量，从而计算出蛋白氮，再进一步算出蛋白质含量。   蛋白氮=总氮-非蛋白氮   蛋白质含量（g%）=蛋白氮×6.25摇龙曝恐梯另

8、兆痰刺冲悲慈舶迎杉低蓬坛滨瓜全查噪针湘毅评茹英优烁杖蛋白质浓度测定方法蛋白质浓度测定方法双缩脲法N端C端命华倚反纲带忱暮俯觉潦猿涪饥榜下忿葫酿栈妻名羔烧嫩顿樱爪博玉繁访蛋白质浓度测定方法蛋白质浓度测定方法双缩脲加热＋　NH322H－1