《经典液相色谱法》PPT课件

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1、1第十六章色谱法基本概念及经典液相色谱法第2节第3节第4节2第一节概述第一节色谱分析法概述色谱法（chromatography）是一种根据物质的物理或物理化学性质不同而进行分离分析的方法。3第一节概述一、色谱法的发展概况色谱法的创始人是俄国植物学家茨维特Tsweet。20世纪30与40年代相继出现了薄层色谱和纸色谱，与柱色谱一起统称为经典的液相色谱法，使色谱法成为一门分离技术。20世纪50年代气相色谱的兴起，使色谱法在理论、仪器以及分离与“在线”分析等方面得到长足发展，奠定了现代色谱法的基础。4第一节概述20世纪70年代高效液相色谱的

2、崛起，弥补了气相色谱不能直接用于分析难挥发、对热不稳定及高分子试样等方面的不足，拓宽了色谱法的应用范围，成为色谱发展史上又一个里程碑。20世纪80年代是色谱迅猛发展的重要时期，相继出现了液相色谱的各种联用技术。经过一个多世纪的发展，色谱法已成为重要的分离分析方法。5第一节概述二、色谱法的分类（一）按两相的分子聚集状态分类液相色谱法（LC）：流动相为液体的色谱法。气相色谱法（GC）：流动相为气体的色谱法。超临界流体色谱法（SFC）：是以超临界流体作为流动相的一种色谱法。6第一节概述（二）按操作形式分类柱色谱法（CC）:将固定相装于柱管内

3、构成色谱柱，色谱过程在色谱柱内进行的色谱法，称为柱色谱。平面色谱法:色谱过程在固定相构成的平面层内进行的色谱法，称为平面色谱。7第一节概述（三）按色谱过程的分离机制分类吸附色谱法（adsorptionchromatography，AC）分配色谱法（distributionchromatography，DC）离子交换色谱法（ionexchangechromatography，IEC）空间排阻色谱法（stericexclusionchromatography，SEC）8第一节概述三、色谱过程色谱法具有相对运动的两相，其一是固定不动的，称为

4、固定相（stationaryphase）；而另一相则是携带试样向前移动的，称为流动相（mobilephase）。色谱过程是物质在相对运动的固定相和流动相之间达到分配平衡的过程。例：顺式与反式偶氮苯的色谱过程。顺式与反式偶氮苯的色谱过程示意图a.加样b.洗脱c.继续洗脱1.顺式偶氮苯2.反式偶氮苯9第二节色谱法的基本概念一、色谱图色谱流出曲线（一）基线：是在操作条件下，仅有流动相通过检测系统时所产生的信号曲线。（二）色谱峰：色谱流出曲线上的突起部分。分为对称峰与不对称峰，后者又分为前延峰和拖尾峰。第二节色谱法的基本概念10第二节色谱法的

5、基本概念色谱流出曲线和色谱峰区域宽度11第二节色谱法的基本概念fs处于0.95～1.05之间为对称峰；小于0.95者为前延峰；大于1.05者为拖尾峰。色谱流出曲线上，一个组分的色谱峰可用峰位、峰高或峰面积及色谱峰的区域宽度等三项参数描述，分别作为定性、定量及衡量柱效的依据。峰高（h）：色谱峰顶至基线的垂直距离。峰面积（A）：色谱峰与基线所包围的面积。12第三节基本色谱法的分离机制吸附色谱过程就是组分不断被吸附、解吸附，再吸附、再解吸附，……，如此反复多次的过程。吸附平衡常数组分的吸附平衡常数越大，组分越容易被吸附，保留时间越长，迁移速

6、度就越慢，即后流出色谱柱。三、分配系数和容量因子13第二节色谱法的基本概念分配系数与容量因子的关系分配系数比（）容量因子（capacityfactor，k）14第二节色谱法的基本概念分配系数、容量因子与保留值的关系分配系数（或容量因子）越小，组分的迁移速度越快，保留时间越短，即先流出色谱柱；反之亦然。分配系数（或容量因子）不等是组分分离的前提。15第三节基本色谱法的分离机制基本色谱法的分离机制一、吸附色谱法分离机制吸附色谱法是以吸附剂为固定相，液体（或气体）为流动相，利用吸附剂对不同组分的吸附能力差异进行分离的色谱法。吸附是指溶质在

7、液-固（或气-固）两相的交界面上集中浓缩的现象。16第三节基本色谱法的分离机制二、分配色谱法分离机制分配色谱法是利用混合物中的不同组分在固定相和流动相中的溶解度不同，即在两相中的分配系数不同而实现分离的。分离机制：流动相携带样品流经固定相时，各组分在两相间不断地进行溶解、萃取，再溶解、再萃取，……，如此多次后，使分配系数稍有差异的组分得以分离。17第三节基本色谱法的分离机制三、离子交换色谱法分离机制离子交换色谱法是利用被分离组分离子交换能力的差别而实现分离的。分离机制：被分离的离子随流动相流经离子交换树脂时，与离子交换树脂上可被交换的

8、离子连续进行竞争交换，因不同离子与交换树脂的竞争交换能力不同，其迁移的速度亦不同，交换能力弱的离子，迁移速度快，保留时间短，先流出色谱柱。18第三节基本色谱法的分离机制离子交换反应：R-B+＋A+R-A+＋B+离子交换反