《无菌检查法钱维清》PPT课件

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1、2010版药典无菌检查法主要增修订及其展望第八、九届药典会微生物专业委员上海市食品药品检验所钱维清国内外药典微生物学检验发展的宗旨：——提高方法捡出率、保证检验结果的准确性、可靠性。1、实验环境、设施的发展；2、培养基的品种和适用性要求；3、检验数量、检验量符合统计学要求；4、检验方法和仪器的改进（薄膜过滤法、全封闭过滤培养器）5、验证试验；（ICH、USP、EP、BP、JP均有规定）6、培养时间；7、结果的分析和判断；等。回顾国际无菌检查法发展历史1925年直接接种法首先使用在英国1932年英国药典推荐使用无菌测试1936年美国药典第十一章首先引用单个培养基的直接接种法19

2、50年美国药典第十六章推荐使用FTG和SB两种培养基分别培养需、厌气菌和真菌1957年美国FDA和MILLIPORE公司介绍膜过滤法用于抗生素无菌测试1963年英国药典63版收载薄膜过滤法无菌测试1965年美国药典引用薄膜过滤法用于非抑菌性药品的无菌测试1971年欧洲药典第二版公布参照薄膜过滤法无菌测试1978年欧洲药典修订版发行公布推荐使用薄膜过滤法无菌测试1988年美国FDA规定：假如第一次无菌检查不符合规定的样品不再复试，这一批次的药品应报废。实际上排除了药品无菌阳性后再测试的机会1998年英国药典1998无菌测试以一次检出为准，取消复试。2000年美国药典24版无菌测

3、试以一次检出为准，取消复试。检视我国历版药典无菌检查法发展历史1953版实验环境仅要求为半无菌操作箱；仅收载一种直接接种法；用一种培养基检查1963版仅一种直接接种法；用三种培养基分别培养细菌和霉菌1977版开始收载薄膜过滤法（简单装置），用二种培养基分别培养细菌和霉菌1985版收载薄膜过滤法限于抗生素样品；用需、厌气菌培养基及霉菌培养基；要求实验环境为紫外线灭菌的无菌室。1990版与85年版相同1995版开始要求对培养基进行灵敏度检查。2000版规定实验环境为100级洁净度；检验数量从2支/瓶增加为6～11支/瓶；明确薄膜过滤法为首选方法包括大容量液体样品首次引用、收载全封

4、闭过滤技术。对比国际无菌检查发展历史，我国2000版以前药典无菌检查法因技术和认识的不足，对提高方法捡出率、保证检验结果的准确性、可靠性方面的规定与先进国家药典中的要求严重脱节。2005版无菌检查法取得长足发展实验环境要求、验证试验、延长培养时间至少为14天、以一次检出为准，取消复试等亮点。是2005年版药典无菌检查法的大步发展，从而使2005年版无菌检查法比历版无菌检查法有了突破性的提高。基本与国际先进药典无菌检查法接轨。2010年版药典无菌检查法的发展，主要是在总结和巩固实施验证试验以来所取得经验及认识的基础上，作两方面的发展：一、附录无菌检查法（一部附录ⅩⅢB）（二部附

5、录ⅪH）（三部附录ⅫA）围绕着保证实验结果的准确性、可靠性作进一步的增、修订。二、品种各论中【无菌】各论化的发展一、附录无菌检查法中的增、修订（一）总则部分（二）培养基部分（三）灵敏度检查部分（四）稀释液、冲洗液部分（五）方法验证部分（六）薄膜过滤法部分（七）培养及观察部分（八）结果判断部分（九）表1、表2和表3（一）总则部分新增规定1、“防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。”2、“日常检验还需要对环境进行监控。”3、“无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。（二）培养基部分1、删除：硫乙醇酸盐流体培养基后括号（用于培养好氧菌、厌氧菌）的说明2、删除

6、：改良马丁培养基后括号（用于培养真菌）的说明3、删除：选择性培养基项下加入适量中和剂或表面活性剂“如对氨基苯甲酸（用于磺胺类供试品）、聚山梨酯80（用于非水溶性供试品）或β-内酰胺酶（用于β-内酰胺类供试品）”等说明。修订为：在培养基灭菌或使用前加入适宜的中和剂、灭活剂或表面活性剂，其用量同验证试验。增订：表1常见干扰物的中和剂或灭活方法(见微生物限度检查法中）干扰物可选用的中和剂或灭活方法戊二醛酚类、乙醇、吸附物醛类季铵类化合物（QACs）、对羟基苯甲酸酯汞类制剂双胍类化合物碘酒、洗必泰类卤化物乙二胺四乙酸（EDTA）磺胺类ß-内酰胺类抗生素亚硫酸氢纳稀释法稀释法、甘氨酸、

7、硫代硫酸盐卵磷脂、聚山梨酯亚硫酸氢纳、巯基乙酸盐、硫代硫酸盐卵磷脂聚山梨酯硫代硫酸盐镁或钙离子对氨基苯甲酸ß-内酰胺酶表1常见干扰物的中和剂或灭活方法4、将原排列第6.的0.5%葡萄糖肉汤培养基（用于硫酸链霉素等抗生素的无菌检查）修订排列为第4.——按顺序归类培养基1.～4.均为直接用于无菌检查的液体培养基。（三）培养基灵敏度检查部分1、在菌液制备中，修订黑曲霉的孢子悬液制备方法：规定应使用含0.05％（v/v）聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液，洗脱孢子及稀释孢子液，制成每1ml中含孢子数小于100