中国药典2015版三部

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1、中国药典三部标准（2005年版）101种A群脑膜炎球菌多糖疫苗拼音名：AQunNaomoyanqiujunDuotangYimiao英文名：GroupAMeningococcaIPolysaccharideVaccine书页号：2005年版三部-34本品系用A群脑膜炎奈瑟菌培养液，经提取获得的荚膜多糖抗原，纯化后加入适宜稳定剂后冻干制成。用于预防A群脑膜炎球菌引起的流行性脑脊髓膜炎。1基本要求生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。2制造2.1菌种生产用菌种应符合“生物制品生产检

2、定用菌毒种管理规程”的有关规定。2.1.1菌种名称及来源生产用菌种为A群脑膜炎奈瑟菌CMCC29201(A4)菌株。2.1.2种子批的建立应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。2.1.3种子批的传代主种子批启开后传代次数不得超过5代，工作种子批启开后至接种发酵罐培养传代次数不得超过5代。2.1.4种子批菌种的检定2.1.4.1培养特性及染色镜检菌种接种于含10%羊血普通琼脂培养基，脑膜炎球菌在25%不生长。于35～37%二氧化碳的环境中培养16～20小时，长出光滑、湿润、灰白色的菌落，菌苔易取下，在

3、生理氯化钠溶液中呈现均匀混悬液。染色镜检应为革兰阴性双球菌、单球菌。2.1.4.2生化反应发酵葡萄糖、麦芽糖，产酸不产气；不发酵乳糖、甘露醇、果糖及蔗糖(附录ⅥV)。2.1.4.3血清凝集试验取经35～37℃培养16～20小时的菌苔，混悬于含0.5%甲醛的生理氯化钠溶液中，或56℃加热30分钟杀菌以后，使每1ml含菌1.o×10〈9〉～2.o×10〈9〉，与同群参考血清做定量凝集反应，置35～3℃过夜，次日再置室温2小时观察结果，以肉眼可见清晰凝集现象(+)之血清最高稀释度为凝集反应效价，必须达到血清原效价之半

4、。2.1.5种子批的保存原始种子批和主种子批应冻干保存于2～8℃。2.2原液2.2.1生产用种子启开工作种子批菌种，经适当传代，经检定合格后，接种于改良半综合培养基或其他适宜培养基，制备数量适宜的生产用种子。2.2.2生产用培养基采用改良半综合培养基或经批准的其他适宜培养基。培养基不应含有与十六烷基三甲基溴化铵能形成沉淀的成分。2.2.3培养采用培养罐液体培养。在培养过程中取样进行纯菌检查，涂片做革兰染色镜检，如发现污染杂菌，应废弃。2.2.4收获及杀菌于对数生长期的后期或静止期的前期中止培养，取样进行菌液浓度

5、测定及纯菌检查，合格后在收获的培养液中加入甲醛溶液杀菌，或采用加热方法杀菌。以确保杀菌完全又不损伤其多糖抗原为宜。2.2.5纯化2.2.5.1去核酸将已杀菌的培养液(单批或多批混合)离心后收集上清液，加入十六烷基三甲基溴化铵，充分混匀，形成沉淀；离心后的沉淀物加入适量氯化钙溶液，其最终浓度为1mol/L，使多糖与十六烷基三甲基溴化铵解离；加入乙醇至最终浓度为25%，2～8℃静置1～3小时或过夜，离心收集澄清的上清液。2.2.5.2沉淀多糖于上述上清液中加入冷乙醇至最终浓度为80%，充分振摇。离心收集沉淀，用无水

6、乙醇及丙酮各洗2次以上，沉淀物即为多糖粗制品。应保存在－20℃以下，待纯化。2.2.5.3多糖纯化将多糖粗制品溶解于1/10饱和中性醋酸钠溶液中，使其浓度达10～20mg/ml；按1：2容量用冷酚(100g结晶酚溶于40ml的1/10饱和醋酸钠溶液)提取数次，离心收集上清液，并用0.1mol/L氯化钙溶液或其他适宜溶液透析，加入乙醇至终浓度为75%～80%；离心收集的沉淀物用无水乙醇及丙酮各洗2次以上，干燥后用灭菌注射用水溶解沉淀物，即为纯化多糖原液。提取过程应尽量在15℃以下进行。2.2.6原液检定纯化多糖原

7、液除菌过滤后，取样按3.1项进行。2.2.7保存及有效期于-20℃以下保存，自多糖粗制品制造之日起有效期为5年。2.3半成品2.3.1配制半成品可由单批或多批多糖原液合并后，用无菌无热原乳糖和灭菌注射用水稀释制成。每1次人用剂量含多糖应不低于30μg，乳糖2.5～3.0mg。2.3.2半成品检定按3.2项进行。2.4成品2.4.1分批应符合“生物制品分批规程”规定。2.4.2分装及冻干应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。冻干过程中制品温度应不高于30℃，真空或充氮封口。2.4.3规格每瓶含多糖150μg、30

8、0μg。每1次人用剂量含多糖应不低于30μg。2.4.4包装应符合“生物制品包装规程”规定。3检定3.1原液检定3.1.1鉴别试验采用免疫双扩散法(附录ⅧC)，本品与A群脑膜炎球菌抗体应形成明显沉淀线。3.1.2化学检定3.1.2.1固体总量依法测定(附录ⅦM)。3.1.2.2蛋白质含量应小于10mg/g(附录ⅥB第二法)。3.1.2.3核酸含量应小于10mg/g，核酸在波长260nm