中国药典2005版三部附录

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1、中国药典三部附录（2005年版）135种页码数：2005版药典附录第44页附录VIGA群脑膜炎球菌多糖第一法测磷法(仲裁法)本法用于测定细菌荚膜多糖在色谱柱中的分配系数(KD)和多糖在规定KD值以前的回收率。试剂(1)流动相取氯化钠11．7g、叠氮钠0．1g，加水使溶解成1000ml，混匀，用O．1mol／L氢氧化钠溶液调节pH至7．O。(2)蓝色葡聚糖2000溶液取蓝色葡聚糖200020mg，加流动相使溶解成10ml。(3)维生素B12溶液称取10mg维生素B12，加流动相使溶解成10ml。色谱柱的制备取琼脂糖4B凝胶或琼脂糖CL-4B凝胶约200ml，加流动相400ml充分搅拌，放置约1小

2、时使其沉淀，倾去上层含悬浮颗粒的悬液。如此反复3～5次后，加流动相200ml，混匀，抽去凝胶中的空气，装于1．5cm×90cm色谱柱中，约87cm高，．用流动相洗脱，流速为每小时15～20ml，以2～3倍柱床体积的流动相洗脱(约500m1)，使柱床平衡。色谱柱的标定取蓝色葡聚糖2000溶液lml加于已平衡的色谱柱中，以流动相洗脱，流速每小时15～20ml，用组分收集器收集洗脱液，每管收集3～5ml，照紫外-可见分光光度法(附录ⅡA)，在波长260nm处测定各管洗脱液的吸光度，以吸光度为纵坐标，洗脱液体积(m1)为横坐标分别作图，260nm波长处的峰顶洗脱液体积为空流体积V0。取维生素B12溶液

3、lml，自“加于已平衡的色谱柱中起，同法操作，370nm波长处的峰顶洗脱液体积为柱床体积Vi。测定法取供试品约lml(含多糖抗原3～5mg，如为冻干制品可用流动相溶解)，加于已标定的色谱柱中，用流动相洗脱，用组分收集器收集洗脱液，每管收集5ml，照磷含量测定法(附录ⅦA)测定每管洗脱液的磷含量。以供试品每管洗脱液的磷含量为纵坐标，洗脱液体积(m1)为横坐标作图，主峰峰顶洗脱液体积为Ve。按下式计算KD=ve-v0/Vi-V0。式中KD为供试品分配系数；Ve为供试品洗脱液体积，ml；V0为空流体积，ml；Vi为柱床体积，ml。计算供试品在KD值<0．5的多糖回收率Rx(％)=Ax/At×100％

4、式中Rx为KD值

5、流动相洗脱，流速为每小时15～20ml，检测波长206nm，用组分收集器收集洗脱液，记录色谱图，即得。按下式计算KD=Ve-V0/Vi-V0式中KD为供试品分配系数；V为供试品洗脱液体积，ml,K为空流体积，m1；Ⅵ为柱床体积，ml。计算供试品在KD值

6、宜的电解质、温度、pH条件下，产生凝集反应，形成抗原抗体复合物，根据供试品的吸光度求出供试品中IgG的含量。试剂(1)缓冲液称取三羟甲基氨基甲烷(Tris)12.42g、氯化钠9g、聚乙二醇(PEG6000)50g、牛血清白蛋白(BSA)1g、叠氮钠(NaN3)1g，加水溶解，用1.0mol/L盐酸调pH至7.4，加水稀释至1000ml。(2)抗人IgG血清按说明书要求将冻干抗人IgG血清复溶，按标示效价取一定量抗人IgG血清，加缓冲液稀释至抗体最终效价为1：4(例如，抗人IgG血清效价为1：100，取原液2ml加抗体缓冲液48ml)，充分混匀，0.45μm膜过滤。4℃保存备用。IgG标准品溶

7、液的制备用生理氯化钠溶液将IgG标准品在每1ml含0.2～6.0mg范围内做适当的系列稀释(通常做5个稀释度)。供试品溶液的制备用生理氯化钠溶液将供试品稀释成高、中、低3个稀释度，其IgG含量均应在标准曲线范围内。测定法取供试品溶液10μl，加已预热至37℃的抗体液1ml，混匀，每个稀释度做2管，37℃水浴中保温1小时，充分混匀，照紫外-可见分光光度法(附录ⅡA)，于波长340nm处分别测定吸光度