实验三福医大白细胞分类计数

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1、实验三血涂片染色及白细胞分类计数目的1.初步掌握血涂片制作及染色技术。2.学会辨认外周血中各种白细胞的形态特点及其分类计数的方法。3.记住其参考值和临床意义。一、血涂片的制备与染色2.操作步骤（1）末梢采血常规消毒皮肤，穿刺后拭去第一滴血。用载玻片的一端刮取血液一小滴。（2）将推片的平齐端置载玻片上血滴的稍前方，将推片略向后移使之与血液接触→血液沿着推片与载玻片的夹角散开(推片的拿法）。（3）以约30°的夹角向前均匀的推动即可制成血涂片，其厚薄要适中，衬以白纸时应呈淡的红黄色，且有头、体、尾之分。一、血涂片

2、的制备与染色（临检指导P10）1.原理由于各种细胞成分的化学性质不同，对染料的反应也不同，导致染色后在同一张血片上可见到不同的色彩。瑞士染色法是血膜、骨髓和印片的常规染色。瑞士染料中含有碱性美蓝和酸性伊红两种成分，它们与细胞内的各种物质具有不同的亲和力，而使细胞显现出不同的色调：（1）血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白，与酸性染料伊红结合，染粉红色，称嗜酸性物质。（2）细胞核蛋白和淋巴细胞胞质为酸性，与碱性染料美蓝结合，染紫色，称嗜碱性物质。（3）中性物质呈等电状态与美蓝、伊红均可结合，染淡紫红色，称中性物质。

3、（4）血涂片干后，滴加瑞氏染液数滴于血涂片上（以盖住血膜为度），静置约1min，目的在于用染液的甲醇成分固定血细胞。（5）加相当于染液1.5-2倍量的缓冲液，用吸耳球充分混匀。（6）冲洗染色约5-10min，即可用水冲去染液干燥后镜检。一、血涂片的制备与染色3.注意事项（1）作血涂片时勿用伤口第一滴血，以免混有来自受损血管的内皮细胞。（2）血涂片薄厚适度，过厚时细胞簇集影响形态观察，过薄则白细胞太少不易分类。影响血涂片薄厚的因素为：①血滴过大、夹角过大、推片速度过快则厚；②血滴太小、夹角过小、推片过慢则薄。

4、（3）加瑞氏染液或缓冲液后，切勿干燥（以免血涂片中有渣干扰镜检）。（4）染色时间的长短根据血膜厚薄、室温及染液配制的时间长短而定。（5）要以流水冲去染液，而不可先弃去染液再冲水，以免留有残渣。二、白细胞分类计数（临检指导P34）1．操作步骤（观察区域的选择）（1）低倍镜观察观察白细胞的分布及染色情况。（2）油镜观察选好厚薄适宜、染色良好且红细胞分布均匀处，滴加香柏油一滴，用油浸镜观察。一般胞体较大的白细胞如嗜酸性粒细胞、单核细胞、中性粒细胞于涂片的上下边缘处多见，而胞体较小的白细胞如淋巴细胞则以涂片中心地带

5、为多。二、白细胞分类计数2.计算通常计数100个白细胞（必要时可增到200或更多），按下图所示方向移动血涂片，同时将所遇到的各类白细胞分别记录、直到计数100个白细胞为止，计算每类白细胞的数目，即其百分数值。分类计数时以画“正”字作如下记录：中性杆状核正中性分叶核正正正正正正正正正正正正正嗜酸性粒细胞一嗜碱性粒细胞淋巴细胞正正正正正单核细胞正一二、白细胞分类计数3.参考值（成人）中性杆状核粒细胞1%-5%中性分叶核粒细胞50%-70%嗜酸性粒细胞0.5%-5%嗜碱性粒细胞0-1%淋巴细胞20%-40%单核细

6、胞3%-8%二、白细胞分类计数4.注意事项（1）分类时一定要用油镜观察，应同时观察白细胞有无质变。（2）分类报告时，有核红细胞应另外计数，并观察成熟红细胞、血小板的形态，注意有无寄生虫及其他异常细胞。（3）染色结果偏酸时，红细胞偏红，嗜酸性颗粒呈鲜艳的桔红色，但各种白细胞的核仅染成极淡蓝色或根本不着色常见于甲醇质量不纯、载物片有残余酸或缓冲液PH过低所致。染色结果偏碱时，红细胞呈灰蓝色，中性粒细胞颗粒为黑蓝色较粗大、似中毒颗粒，核染为深紫蓝色，着色均匀结构不清，嗜酸性颗粒失去鲜艳色彩而呈褐色甚至黑蓝色，常因

7、染液偏碱或玻璃片有残余碱所致。二、白细胞分类计数5.方法学评价是传统的分类法，能及时准确的发现异常细胞。