《实验五福医大计数》PPT课件

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1、实验五血小板计数（临检指导P48）目的掌握普通光学显微镜直接血小板计数法。1.概述血小板是由骨髓中成熟巨核细胞的胞质分割而生成。其生成受血小板生成素（TPO）的调节。正常静息状态下，血小板为双面微凸的圆盘形，直径2～4μm、平均体积7.2fl的非细胞结构成分。染色后镜下可见血小板的胞质呈淡蓝色，内含较多的紫红色嗜天青颗粒。血涂片上，为红细胞数的1/30~1/20，通常每个油镜视野可见7~35个，分散或3~5成群分布。2.光学显微镜直接计数法（1）原理血液(20μl)经稀释液(0.38ml)按一定比例稀释和破坏红细胞后，

2、充入血细胞计数池内，在显微镜下计数一定范围内的血小板数，经换算求出每升血液中的血小板数量。由于血小板易黏附、聚集以致破坏，优质的血小板稀释液应具备的条件是：（1）有效地阻止凝血。（2）很快地固定血小板，防止血小板聚集和变形。（3）溶血稀释液要求红细胞破坏完全。（4）组成简单、容易保存、不长细菌。根据所采用的稀释液不同而又分为破坏红细胞稀释法（溶血法）：草酸铵溶血法：对红细胞破坏力强，血小板形态清楚。为首选常规计数方法。复方尿素溶血法：尿素可溶解红细胞、甲醛可固定血小板和防腐，稀释后血小板胀大易辨认，尿素容易分解，试剂容

3、易失效。尿素不能完全破坏红细胞。高铁氰化钾溶血法：试剂稳定易于长期保存但不能完全破坏红细胞。不破坏红细胞稀释法：复方碘稀释液。红细胞未破坏及试剂易细菌生长，干扰计数，已被淘汰。实验五血小板计数（2）操作步骤1）吸取稀释液：准确吸取10g/L草酸铵溶血剂0.38ml于小试管内。2）采血：准确采血20μl加入上述试管，立即充分混匀。3）静置：待完全溶血后再混匀1min。4）充池：混匀血小板悬液，并取1滴充入血细胞计数池，静置10min。5）计数：用高倍镜计数中央大方格内的中央及四角共5个中方格内的血小板数量。实验五血小板计

4、数（3）计算血小板数/L=N×5×10×20×106=N×109/L参考值：（100~300）×109/L实验五血小板计数（4）注意事项1）稀释液必须符合优质的血小板稀释液，因此稀释液必须新鲜、洁净，无杂物和细菌污染；定期检查稀释液的质量，实验前应先做稀释液空白计数，符合仪器使用说明方可使用。2）器材及操作必须标准化和规范化①所用器材必须校准、洁净、干燥。②采血、充液、计数均应规范，避免血小板激活或破坏。③血小板悬液充入计数池后必须静置15min再计数，并在采血后1h内完成计数。时间过短或过长则可导致血小板未完全下沉或

5、失去光泽，使计数结果偏低。④充液前必须轻轻摇动血小板悬液2min或200次以上，但用力不宜过大，以免造成血小板破坏或产生气泡，引起计数误差。⑤镜下观察时的光线要适中，并注意与细胞碎片、灰尘、微生物等鉴别。3）及时核准血小板计数结果由经验丰富的检验人员进行。常用的方法有：①用同1份血标本制备良好的血涂片，观察血小板数量、形态和分布情况，进行核对。②用血小板计数的参考方法核对计数结果。③每份标本最好做2次计数，若2次计数误差小于10%，取其均值报告；若计数误差大于10%，应做第3次计数，取2次相近结果的均值报告。4）排除非

6、技术因素的影响某些病理情况可干扰计数，出现血小板假性减少或增多。①血小板聚集或凝集、异常蛋白血症、巨大血小板、卫星现象、高脂血症导致血小板假性减少。②HbH包涵体病人的红细胞碎片、慢性淋巴细胞性白血病病人的淋巴细胞核和细胞质碎片、小红细胞等可被误认为血小板，导致血小板假性增多。5）标本采集最好清晨采血，采集过程中应避免反复握拳、拍打采血部位、扎止血带的时间过长（＜1min），以免血小板激活而影响计数结果。采血后立即进行血小板检测。（5）方法学评价1）普通光学显微镜直接计数法：以草酸铵溶稀释液法为常规方法和参考方法。2）

7、相差显微镜直接计数法：此法计数的准确性高，血小板易于识别，并可于照相后核对计数结果，是计数血小板的参考方法。但由于所用仪器昂贵，临床上较少选用。3）血细胞分析仪计数法：简便、快速、重复性好，可同时测定血小板、MPV及PDW等多个指标的特点，已广泛用于临床。但由于电阻抗法不能完全区分血小板与其他类似大小的物质，致使计数结果的误差较大，其计数结果有时仍需要显微镜直接计数法进行复核。4）流式细胞仪：特异、准确、但需特殊仪器和试剂。