《微生物生长和控制》PPT课件

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1、第七章微生物的生长与控制生命个体重量的增加和体积的增大生长生命个体数目的增加繁殖群体中个体数目的增加。可以用重量、数量、浓度等来衡量。群体生长群体生长=个体生长+个体繁殖第一节微生物纯培养的分离方法纯培养(pureculture):在实验条件下由一个细胞经培养繁殖而得到的后代。平板划线分离法稀释平板法单孢子或单细胞分离法选择性培养基分离法①平板划线分离法（StreakPlate）特点：快速、方便。分区划线（适用于浓度较大的样品）连续划线（适用于浓度较小的样品）②稀释平板法（SpreadPlate）

2、应用广泛，适合于各大类微生物的分离③单孢子或单细胞分离法采用显微分离技术从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以获得纯培养的方法。毛细管法：用毛细管提取微生物个体，适合于较大微生物。显微操作仪：用显微针、钩、环等挑取单个细胞或孢子以获得纯培养。④选择性培养分离法＊利用选择培养基进行直接分离Ashby培养基、Martin培养、高氏1号等。＊富集培养方法一：可利用该分离对象对某种营养物有特殊“嗜好”的原理，专门在培养基中加入该营养物。如加入纤维素、石蜡油、较浓的糖液等来富集相应的M。方法二：利

3、用该分离对象对某种抑菌物质所特有的抗性，而使其大量繁殖。如加入抗生素。同时用于选择性的其他理化因子还有温度、氧、pH、渗透压等。第二节微生物生长繁殖的测定测定目的：①评价培养条件、营养物质等对微生物生长的影响；②评价不同的抗菌物质对微生物产生抑制(或杀死)作用的效果；③客观地反映微生物生长的规律；个体计数法直接法间接法血球计数板法涂片染色法平板菌落数法薄膜过滤计数法比浊法重量法生理指标法①直接法-血球计数板法1.个体计数法1适用范围：个体较大细胞或颗粒，如血球、酵母菌等。不适用于细菌等个体较小的细

4、胞，因为（1）细菌细胞太小，较透明；（2）在油镜下看不清网格线，超出油镜工作距离。特点：快速，准确；不易区分死菌和活菌。解决方法：用美蓝液对酵母菌染色后，其活细胞为无色，而死细胞则为蓝色①直接法-涂片染色法应用：适于土壤、牛奶中细菌计数。方法：用镜台测微尺计算出视野面积；取0.1ml菌液涂于1cm2面积上，计数后代入公式：每ml原菌液含菌数=视野中平均菌数×涂布面积/视野面积×10×稀释倍数②间接法-平板菌落计数法原理：每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落。特点：最为常用

5、,只计活菌数，但操作较烦琐且要求操作者技术熟练。改进技术：现在已出现多种微型、快速、商品化的用于菌落计数的密封琼脂板。原理是利用活菌批示剂TTC（2,3,5-氯化三苯基四氮唑)，它可使菌落在很微小时就染成易于辨认的玫瑰红色。常用该法测定含菌量较少的空气和水中的微生物数目。将定量的样品通过薄膜（硝化纤维素薄膜、醋酸纤维薄膜）过滤，菌体被阻留在滤膜上，取下滤膜进行培养，然后计算菌落数，可求出样品中所含菌数。②间接法--薄膜过滤计数法原理:在一定范围内，菌悬液中的细胞浓度与混浊度成正比，即与光密度成正比

6、，菌数越多，光密度越大。因此，借助于分光光度计，在一定波长下测定菌悬液的光密度，就可反应出菌液的浓度。特点：快速、简便；但易受干扰。②间接法-比浊法测定范围：多细胞及丝状真菌的生长将一定量的菌液中的菌体通过离心或过滤分离出来,然后烘干(干燥温度可采用105℃、100℃或80℃)、称重。（微生物的干重一般为其湿重的10~20%）2.重量法测含氮量蛋白质是细胞的主要物质，含量稳定，而氮是蛋白质的主要成分，通过测含氮量就可推知微生物的浓度。一般细菌含氮量为干重的12.5%，酵母菌为7.5%，霉菌为6.0

7、%，根据一定体积培养液中的含氮量再乘以6.25，就可测得粗蛋白的含量。其他方法含碳、磷、DNA、RNA、耗氧量、消耗底物量、产二氧化碳、产酸、产热、粘度等，都可用于生长量的测定。3.生理指标测定法第三节微生物的生长规律一、单细胞微生物的群体生长规律生长曲线(growthcurve):定量描述液体培养基中微生物群体生长规律的实验曲线.方法:将少量细菌的纯培养体接种到恒容积的液体培养基中,在适宜的条件下培养,定期测定菌体数量,以培养时间为横坐标，以菌数对数为纵坐标，作出一条反映细菌在整个培养期间菌数变

8、化规律的曲线。按照生长速率常数（growthraceconstant），即每小时分裂次数（R）的不同，可将生长曲线分为:延滞期、对数期、稳定期、衰亡期。1.延滞期（lagphase）其它名称：停滞期、调整期、适应期现象：活菌数没增加，曲线平行于横轴。特点：分裂迟缓，代谢活跃。生长速率常数=0；细胞形态变大或增长；细胞内RNA特别是rRNA含量增高；合成代谢活跃（核糖体、酶类、ATP合成加快），易产生诱导酶。原因：适应新的环境条件，合成新的酶，积累必要的中间产物。①通过遗传学方法改变