《基因工程复习》PPT课件

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1、1.5基因工程复习课专题1基因工程一、基因工程的概念。二、基因工程的基本工具1.“分子手术刀”—（1）来源：主要是从中分离纯化出来的。（2）功能：使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的键断开.（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：和.2.“分子缝合针”—。与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接的末端，形成磷酸二酯键。限制性内切酶原核生物磷酸二酯黏性末端平末端DNA连接酶单个核苷酸两个DNA片段自主检测3.“分子运输车”—。（1）载体具备的条件：①。②。③。（2）最常用的载体是,它是一种裸露的

2、、结构简单的、独立于，并具有的双链DNA分子。（3）其它载体：。三、基因工程的基本操作程序第一步：。1.目的基因是指：。2.人工合成目的基因常用方法有和。载体能在受体细胞中复制并稳定保存具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择质粒细菌染色体DNA之外自我复制能力环状噬菌体的衍生物、动植物病毒目的基因的获取编码蛋白质的结构基因反转录法化学合成第二步：。1.组成：＋＋＋。（1）启动子：是一段有特殊结构的，位于基因的，是识别和结合的部位，能驱动基因转录出，最终获得所需的。（2）终止子：也是一段有特殊结构的，位于基因的。（3）标记基因：是为了鉴定

3、受体细胞中是否含有，从而将筛选出来。常用的标记基因是。基因表达载体的构建目的基因启动子终止子标记基因DNA片段首端RNA聚合酶mRNA蛋白质DNA片段尾端目的基因含目的基因的细胞抗生素基因第三步：。1.转化的概念：.。将目的基因导入受体细胞是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程2.常用的转化方法：将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是。①农杆菌特点，易感染植物和裸子植物，而对大多数植物没有感染力；②将目的基因导入动物细胞：最常用的方法。此方法的受体细胞多是。第四步：。1.首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入，方法是采用。2.其次还要检测目的基因是否

4、转录出了，方法是采用。3.最后检测，方法是从转基因生物中提取，用相应的进行。4.有时还需进行的鉴定。农杆菌转化法单子叶双子叶显微注射技术受精卵目的基因的检测和表达目的基因DNA分子杂交技术mRNA用标记的目的基因作探针与mRNA杂交目的基因是否翻译成蛋白质蛋白质抗体抗原－抗体杂交个体生物学水平磷酸二酯键作用部位：________磷酸二酯键B.DNA连接酶②特点：_________。①作用：能切断外来的_________。DNA(两个“特定”）③作用部位：________________（3）主干知识磷酸二酯键特异性A.限制性内切酶点拨:黏性末端黏性末端EcoRⅠ2.运载体：常用质

5、粒质粒特点：1、细菌染色体外很小的双链环状DNA分子2、能自我复制并在受体细胞中稳定存在3、有一个或多个限制酶切点4、有特殊的遗传标记基因注意：真正用作运载体的质粒都是人工改造过的。点拨:（4）易错点提醒①运载体不是酶。②限制性内切酶和DNA连接酶的作用部位都是磷酸二酯键。③DNA分子中氢键的形成不需要酶的催化。④数量关系：限制酶切线性DNA一个切口，可得2个DNA片段；切环状DNA一个切口，可得1个DNA片段.①目的基因与运载体结合需要的工具酶：________________________。B.目的基因与运载体结合②目的基因与运载体结合的结果可能有：____________

6、____________________。同种限制性内切酶和DNA连接酶目的基因与目的基因结合；质粒与质粒结合；目的基因与质粒结合（4）易错点提醒①分子水平:检测基因是否导入了细胞——DNA分子杂交；检测基因是否转录出了mRNA——用基因探针与mRNA杂交；检测基因是否表达出蛋白质——提取蛋白质，用抗体与抗原特异性结合。②个体水平:如转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。A.检测方法:B.基因工程步骤中，只有第一、二、四步发生碱基互补配对。A.基因诊断的原理：____________DNA分子杂交（3）主干知识点B.基因治疗的原理：把_____________导入有__________

7、的细胞中，达到治疗疾病的目的。正常的外源基因基因缺陷（4）易错点提醒①若受精卵时进行基因治疗，则个体中每个细胞都含有正常基因。若对患者局部进行基因治疗，则只有该部位有正常基因。②基因治疗不能使缺陷基因改变为正常基因。③DNA黏性末端黏合，不属于DNA分子杂交。如下图所示，两个核酸片段在适宜的条件下，经X酶的催化作用，发生下述变化，则X酶是（）A．DNA连接酶B．RNA聚合酶C．DNA聚合酶D．限制酶A例题1采用基因工程技术将人凝血因子基因导入山羊受精卵，培育出了转基因羊。但是，人