紫外分光光度法测定维生素C和维生素E含量

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1、紫外分光光度法测定维生素C和维生素E含量【摘要】本实验利用紫外分光光度法测定由维生素C和维生素E组成的混合物中各组分的浓度。在这两种组分组成的混合物中，彼此都不影响另一种物质的光吸收性质，根据相互间光谱的重叠的程度采用相对的方法进行定量测定。【关键词】紫外分光光度法；维生素C；维生素E；浓度1、引言维生素C（抗坏血酸）和维生素E(α-生育酚)在食品中能起抗氧化剂作用，即它们在一定时间内防止油脂变性。两者结合在一起比单独使用的效果更佳，因为它们在抗氧化性能方面是“协同的”。因此，它们作为一种有用的组合试剂用于各种食品中。维生素C是水溶性的，维生素E是酯溶性的，它们都能溶于无水乙醇，

2、因此能在同一溶液中，能够利用紫外可见分光光度法测定双组分相同的原理，在紫外光区测定它们。2、实验原理根据朗伯—比尔定律，用紫外—可见分光光度法很容易定量测定在此光谱区内有吸收的单一成分。由两种组分组成的混合物中，若彼此都不影响另一种物质的光吸收性质，可根据相互间光谱重叠的程度，采用相对的方法来进行定量测定。例如，当两组分吸收峰部分重叠时，选择适当的波长，仍可按测定单一组分的方法处理；但当两组分吸收峰大部分重叠时，则宜采用解联立方程组或双波长法等方法进行测定。混合组分中在λ1处的吸收等于组分A和组分B分别在λ1处的吸光度之和，即：同理，混合组分在λ2处吸光度之和应为：若先用A、B组

3、分的标样，分别测的A、B两组分在和处的摩尔吸收系数、、、；当测的未知试样在λ1和λ1处的吸光度和后，解下列二元一次方程组：即可求得A、B两组分各自的浓度和。一般来说，为了提高检测的灵敏度，λ1和λ2宜分别选择在A、B两组分最大吸收峰处或其附近。3、紫外分光光度法测定维生素C和维生素E含量3.1、仪器试剂仪器：紫外-可见分光光度计（天津港东UV-4501S），石英吸收池一对试剂：维生素C（抗坏血酸），维生素E(α-生育酚)，无水乙醇3.2、实验步骤3.2.1、检查仪器开机预热20min，并调试至正常工作状态。3.2.2、配制系列标准溶液（1）配制维生素C系列标准溶液：称取0.013

4、2g维生素C，溶于无水乙醇中，定量转移入1000mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至标线，摇匀。此溶液浓度为7.50×mol/L。分别吸取上述溶液4.00mL，6.00mL，8.00mL，10.00mL于4只洁净干燥的50mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至标线，摇匀。（2）配制维生素E系列标准溶液：称取维生素E0.0488g，溶于无水乙醇中，定量转移入1000mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至标线，摇匀。此溶液浓度为1.13×mol/L.分别吸取上述溶液4.00mL，6.00mL，8.00mL，10.00mL于4只洁净干燥的50mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至标线，摇匀。3.2.3、绘制吸收光谱

5、曲线以无水乙醇为参比，在220～320nm范围测定维生素C和维生素E的吸收光谱曲线，确定维生素C和维生素E的最大吸收波长λ和λ，分别作为和。3.2.4、绘制标准曲线（1）维生素C标准曲线：以无水乙醇为参比，分别在波长和处测定5个维生素C标准溶液的吸光度值。（2）维生素E标准曲线：以无水乙醇为参比，分别在波长和处测定5个维生素E标准溶液的吸光度值。3.2.5.、未知液的测定取未知液5.00mL于50mL容量瓶中，用无水乙醇稀至标线，摇匀.在波长和处分别测定其吸光度。3.2.6、结束工作（1）实验完毕，关闭电源。取出吸收池，清洗晾干后入盒保存。（2）清理工作台，罩上仪器防尘罩，填写仪

6、器使用记录。4、实验数据处理4.1、、测定红色曲线——维生素C光度吸收曲线黑色曲线——维生素E光度吸收曲线由仪器作图分析直接可得=273.1nm，=291.9nm。4.2、Vc与Ve在、处的光度吸收图Vc/Ve（mL）Vc1=8Vc2=12Vc3=16Vc4=20Ve1=8Ve2=12Ve3=16Ve4=20未知=273.1nm0.0590.06280.06790.07210.06080.0630.06680.06820.068=0.04030.04190.04250.04380.05740.06490.07520.08160.07244.3、Vc与Ve的标准曲线图Vc在处的线性

7、回归方程为：y=1480x+0.04991，=1480.Vc在处的线性回归方程为：y=370x+0.03824，.Ve在处的线性回归方程为：y=575.22124x+0.0556，.Ve在处的线性回归方程为：y=1834.070x+0.04076，=1834.070.4.4、Vc、Ve的浓度=0。068=0。0724=1480=1834.070代入下式有=代入下式有5、结果分析与讨论在本实验中，要用石英比色皿而不能用玻璃比色皿，这是因为一般紫外光区用石英比色皿,可见光区用玻璃比色