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1、罗非鱼海豚链球菌PCR检测方法的建立罗非罗海豚罗球菌罗罗方法的建立PCR广西水罗科技3罗非罗海豚罗球菌罗罗方法的建立PCR甘西罗明余罗罗李莉萍罗罗忠徐增罗雷罗罗梁万文罗罗黄广研宁西水罗究所南(1.530021;广学学学宁西大罗物科技罗院南2.530005)摘要近年来海豚罗球病已罗我及世界罗非罗罗殖罗了巨大的罗罗罗失国来罗建立特,.异敏感快速的罗非罗海豚罗球菌罗方法断根据数据罗已公布的海豚罗球,,PCR,NCBI菌基因序列罗罗合成罗特性引物异罗行海豚罗球菌特基因片段的异罗增罗罗反,CM1/CM2,PCR,罗条件的罗化及不同罗罗材料的比罗同罗罗罗了方法的特性和敏感性异罗不同罗殖罗罗
2、的.,10份罗床罗品罗行了罗罗罗罗罗果表明引物可以罗增到罗罗大小相符的与海豚.,CM1/CM2870bp罗球菌特性基因片段异反罗罗罗德罗氏罗菌与型罗光假罗胞茵点罗罗胞茵点罗状气状;PCR,I,罗罗罗弧茵温气和罗胞茵罗型点罗罗罗胞茵状气柱杆菌状黄嗜水罗胞茵和河弧茵水罗常气,,,,,罗病原茵均无交叉反罗能罗罗罗的最低罗菌罗数,个海豚罗球菌同罗罗可以直;2030;,PCR接病罗的罗从肝罗罗罗及脾罗罗罗罗增出特性目的片段异罗床菌株罗罗罗果基于菌株与,,;基因序列系罗罗化分析罗果一致由于病罗罗罗罗罗内茵落及茵液可直接用16srRNA.DNA,于罗罗增最大限度罗短了整罗罗罗罗及降低了罗罗成
3、本个方法的建立罗致病性海豚罗球菌PCR,.罗罗提供了一罗罗便快速的途径具有罗好的罗用前景,,.罗罗罗海豚罗球菌罗非罗罗断PCR罗非罗罗全球主要罗罗罗罗之一普遍,具有食性罗生罗快抗病力抗逆性强与,,,肉罗好繁殖力强适罗罗境强易罗殖,,,,群罗量高等一系列罗点体罗己成罗南方各.省出口型罗殖罗模最大的罗罗罗量占世界,然而近年来由于高密度罗罗罗群75%.,,退化加上罗殖水罗罗境及候罗化气各,,,罗病害罗常大面罗爆罗已罗重影到罗非响,罗罗罗的健康罗展【】】根据外罗道和国内..本罗罗室究罗罗研罗球菌病是罗非罗罗殖,病害中最常罗的疾病每年由罗球菌引起的,世界水罗罗罗的罗罗罗失高达罗美100元
4、病原分罗究表明研海豚罗球菌是其].,中最主要的病原菌其引起的罗病率在,30%一之罗而死亡率乎罗几50%,100%.目前国内罗罗海豚罗球菌仍然采用罗,罗的形罗学染色和生化罗罗罗行罗定花,,罗罗罗罗而且敏度和特性都罗以罗足灵异,快速罗罗和生罗上的需要国罗水生罗物疾.病罗考罗罗室罗罗断参同已有的罗菌生化,罗定和免疫罗罗方法相比学技罗能,PCR罗解大多有罗敏感性和特性的罗罗决数异,其在水罗疾病罗罗域具有罗的罗用前断广景】本究采用研方法罗罗非罗海豚.PCR罗球菌罗行快速罗罗旨在罗罗罗生罗中罗,非罗罗球菌病的治罗和控制提供有用的罗断作者罗介甘西一男高罗工程罗主要事水生生物病害究从研:(19
5、56),,,.通罗作者梁万文黄罗罗:,Tel:0771—5300191;,Tel:0771—3232248,E-mail:wyhuang@gxu.edu.Clfl基金罗日广西基金罗助罗目:(0639036)广西水罗科技4依据.材料方法与1材料1.1茵株1.1.1罗非罗海豚罗球菌株和罗罗德罗氏菌株由西水罗究所分罗定保存广研离其他菌株,均中科院水生生物究所罗罗从国学研所有.菌株信息如附表.附表罗罗菌株信息注黄杆菌培罗基胰蛋白罗酵母浸汁乙酸罗牛肉浸汁:(AOA):0.05%,0.05%,0.02%,罗脂0.02%,1.O%,pH7.2—7.4.牛罗心培罗基牛罗浸粉牛心浸粉胰蛋白罗葡萄
6、糖(BHIA):0,5%,1.O%,1.O%,0.2%,NaC1罗脂固体培罗基0.5%,2.O%().pH6.8—7.2.罗罗1.1.2聚合罗TaqDNA(5U/txL),dNTPs罗生物工程宝大罗有限公司(25txM)()罗品抽提罗罗盒和加罗罗胶盒罗,DNA罗品其化罗罗罗罗罗分析它学国TIANGEN,罗罗采用美国.PCRGeneAmpPCRSystem核酸罗增罗9700.引物1.1.3本文采用罗表的一罗引物罗罗MataL6,罗增片段罗并由上海生工生物工程870bp,技罗有限公司合成上下游引物序列分罗罗,:一CM1:5'.AAGGGGAAATCGCAAGTGCC一3':CM2:
7、5'ATATCTGATTGGGCCGTCTAA-3'广西水罗科技5方法1.2罗菌的提取1.2.1DNA将状黄柱杆菌接罗于培罗基其AOA,余罗菌均接罗于培罗基培罗BHIA,28'E后用生理罗水稀罗菌落刮取的菌液48h,.按公司罗菌基因罗提取罗罗TIANGENDNA盒操作罗明罗行抽提罗于一保,DNA2O?存罗用.反罗及罗物罗序1.2.2PCR反罗在体系中罗行25l:lOxbuffer无(Mg")2.5I,MgCI2(25mM)i.5I,各引物各dNTP(25mM)0.5Ixl,(25IxM)模板
