全基因组扩增技术

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1、全基因组扩增(whole gemome amplification，WGA)是一组对全部基因组序列进行非选择性扩增的技术，其目的是在没有序列倾向性的前提下大幅度增加DNA的总量。其基本原理为：采用的多重置换扩增（MDA）技术，能对基因组DNA进行稳定的扩增。利用随机六碱基引物在多个位点与模板DNA退火，接下来在高扩增效率和保真性的Phi29 DNA聚合酶在DNA的多个位点同时起始复制，它沿着DNA模板合成DNA,同时取代模板的互补链。被置换的互补链又成为新的模板来进行扩增，因此最终我们可以获得大量高分子量的DNA。 全基因扩增中使用独特的Phi 29 DNA

2、聚合酶，该酶对于模板有很强的模板结合能力，能连续扩增100Kb的DNA模板而不从模板上解离。同时这种酶具有3’—5’外切酶活性，可以保证扩增的高保真性。目前市场上普遍采用Qiagen公司的Repli-g Mini Kit 系列全基因组试剂盒。本试剂盒的开发对国内用于全基因扩增领域有着广泛的应用前景。可以从少量样本中稳定扩增全基因组DNA。该试剂盒的开发过程包括分离和扩增DNA的试剂，适用的样本广泛，包括已纯化的基因组DNA、全血、组织培养细胞、显微切割得到的细胞、速冻的组织切片、血浆血清中的细胞、口腔细胞、血斑。具有以下特点：1.产物应用途径广阔PCR（包括

3、多重PCR、长片段PCR以及定量PCR）、克隆、文库构建、单倍型确定、测序、基因芯片、遗传分析（片段差异、微卫星差异、单碱基差异、SNP、STR等）。2、高产量10ng基因组DNA经扩增后可产生〉15ug（20ul反应体系）的DNA反应产物，扩增倍数可达上万倍。3、扩增产物长度以及覆盖率有保证这是我们公司全基因组扩增技术（多重置换扩增技术），这不是一个PCR过程。目前这个技术比较流行，之前的技术已经有些过时。我们试剂盒里的BUFFER已经包含了引物，客户无需另外购买。4.实验原理图：5.REPLI-gUltraFastMiniKit