实验一血涂片及骨髓片的

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1、血涂片及骨髓片的制备及瑞氏染色一、目的掌握血涂片、骨髓涂片的制作及染色技术。鉴别外周血中各种白细胞的形态特点及分类计数方法。二、原理瑞氏染液是由伊红美兰所组成的复合物，经物理吸附及化学作用对细胞进行染色。三、材料血针、玻片、酒精棉光学显微镜、香柏油、二甲苯、一次性采血针四、方法㈠血涂片的制作⒈采血：每组两个同学，练习耳垂采血（包括消毒、扎针、挤压、取血），用推片取血液一滴，于玻片右端，从其右侧接触血液，使之成40度角，均匀平稳地向左侧推进，，至血滴推尽为止，其厚度要适中，且有头体尾之分。⒉待血片干后，滴加瑞氏染液数滴（盖住血膜），静置40秒，加缓冲液等量混匀，染10~20分钟，用水冲洗

2、，干燥后镜检。⒊镜检计数：在血膜头尾交界处，计数100个白细胞，并对其进行分类。㈡骨髓片的制备⒈将临床医生所取骨髓至玻片高端（在准备涂片时，将两玻片倾斜放置），使过多血液流下。⒉蘸取骨髓适量（选择骨髓小粒部分），以30~45度角，用力推开，速度适宜。然后将玻片于空中挥动，使之干燥，以免细胞缩小或细胞皱缩。⒊骨髓片制备好后，用标记笔在膜的头部注明病人的姓名、取材部位及穿刺部位。五、结果杆状核粒细胞(StabGranulocyte)细胞呈圆形，直径10－15um。胞核狭长，弯曲呈带状，两端钝圆。核染色质粗糙呈块状，染深紫红色。胞质中含特异性颗粒的不同，也可分为中性、嗜酸性、嗜碱性杆状核粒细胞

3、三种，颗粒特点同中幼粒细胞。中性分叶核细胞细胞呈圆形，直径10－15um。胞核常分为2－5叶，以分3叶者多见，叶与叶之间有细丝状相连或完全断开，核染色质浓集或呈小块状，染深紫红色。胞质丰富，呈淡红色，布满细小紫红色的中性颗粒。嗜酸粒细胞嗜酸粒细胞胞体直径11－16um，胞核多分为近似对称的两叶。胞质中充密集粗大、大小均匀的桔红色嗜酸性颗粒。嗜碱性粒细胞嗜碱性粒细胞胞体直径10-12um胞核分叶不明显，或融合呈堆集状。胞质中有稀疏的大小不一、分布不均、呈紫黑色的嗜碱性颗粒，颗粒常掩盖在核上，致使核的轮廓和结构模糊不清。大淋巴细胞呈圆形，直径13-18um。胞核圆形或椭圆形，偏于一侧或着边。

4、染色质常质密呈块状，排列均匀，深染呈深紫红色。胞质丰富，呈透明天蓝色，可有少量大而稀疏的嗜天青颗粒。小淋巴细胞呈圆形或椭圆形，直径6-10um胞核圆形或椭圆形，或有切迹，核着边，染色质粗糙致密，呈大块状，染深紫红色。胞质量极少，仅在核的一侧见到少量淡蓝色胞质，有时几乎不见而似裸核，一般无颗粒。单核细胞(Monocyte)圆形或不规则形，直径12-20um，边缘常见伪足突出。胞核形状不规则，常呈肾形、马蹄形、笔架形、“S”形等，并有明显扭曲折叠。染色质疏松细致，呈淡紫红色丝网状。胞质丰富，呈淡灰蓝色或淡粉红色，可见多数细小、分布均匀、细尘样淡紫红色颗粒。血小板直径2-5um，约为成熟红细胞

5、的1/4--3/4，类圆形，星形与不规则形，淡红色，无核。成熟红细胞正常形态呈双凹盘形，直径7.5um，瑞氏染色为红色中心稍淡染