实验一血涂片的制作及免疫细胞的形态观察

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1、实验一血涂片的制作及免疫细胞的形态观察一、实验目的学习掌握血涂片制备和染色方法;比较观察各种免疫细胞的形态。二、实验原理血涂片是血液学研究中的最基本技术。将血液样品制成单层细胞的涂片标本。为观察细胞内部结构，识别各种细胞，血涂片必须进行染色。血涂片的各种染色方法大多是罗氏（Wright）染色法衍变来的。目前常用瑞特氏染色法。瑞氏染料是由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成有复合染料。细胞的染色既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用，各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样。因此，经瑞氏染液染色后，不同免疫细胞中的颗粒可以呈现不同的颜色。根据细

2、胞中颗粒的颜色、大小及多少，再结合细胞的大小及细胞核的形态，就可以将免疫细胞进行分类计数。三、实验用品实验材料：酒精棉球、载玻片、眼科镊、眼科剪等。试剂：瑞氏（Wright）染液。四、实验步骤１.准备洁净玻片两张，一张用于推片，另一张用于固定标本。２.剪断小鼠尾巴取血或小鼠眼球取血，迅速在玻片上涂血膜制备血涂片，自然干燥。涂片将一滴血置于载玻片的一端，再取另一张边缘光滑的载玻片，斜置于血涂片的前缘，先向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片端展开成线状，两玻片的角度以30-40度为宜（角度过大血膜较厚，角度小则血膜薄），轻轻将载玻片向前推进，即涂成血液薄膜

3、（如图），推进时速度要一致，否则血膜成波浪形，厚薄不匀。3．瑞氏染色待涂片在空气中完全干燥后，滴加数滴瑞氏染液盖满血膜为止，染色1min。染1分钟后，再加等量的缓冲液或蒸馏水于染色液上，吹匀,浸染约8-10分钟。用蒸馏水迅速冲洗。待自然干燥后或用吸水纸吸干,即可置血涂片于显微镜下进行镜检脱色：用20%盐酸甲醇脱色，肉眼观察玻片呈粉红色为宜，显微镜下观察结果。（省略）4．观察分别用低倍、高倍镜观察血涂片，分辨不同的血细胞类型。淋巴细胞颗粒细胞（嗜酸性、嗜碱性、嗜中性）单核细胞红细胞与血小板五、实验结果绘图并比较几种免疫细胞的形态特征。红细胞血小板未成熟中

4、性粒细胞大淋巴细胞成熟的中性粒细胞嗜酸性粒细胞嗜碱性粒细胞单核细胞血涂片血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质与酸性染料伊红结合染粉红色称为酸性物质；细胞核蛋白和淋巴细胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合,染蓝色或紫色称为嗜碱性物质；中性颗粒成等电状态与伊红和美蓝均可结合,染紫红色称中性物质neutrophilslymphocytesmonocytesBasophils,eosinophil