实验二 血涂片及染色.ppt

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1、实验二血液标本采集血涂片制备【目的】掌握血涂片的制备和染色。【原理】把血液制成细胞分布均匀的薄膜涂片，用瑞吉氏染液染色。不同的细胞种类及细胞的不同成分，对酸性及碱性染料的结合能力不同，而使各种细胞呈现出各自的染色特点。【器材】载玻片、推片、微量吸管、乳胶吸头。【标本】EDTA抗凝静脉血。染色【试剂】1．瑞吉式染液(1)I液:包含瑞氏染料1.0g、吉式燃料0.5g、纯甲醇600ml、甘油15ml。(2)Ⅱ液:磷酸盐缓冲液(pH6.4～6.8)，含磷酸二氢钾0.3g、磷酸氢二钠0.2g、蒸馏水加至1000ml。【操作】(1)采血(2)推片，推片与载片夹角30-4

2、5度平稳地向前移动，血膜应呈舌状，头、体、尾三部分，且清晰可见。(3)干燥:晃动。37℃温箱中促干。(4)染色:将玻片平置于染色架上，滴加(Ⅰ液)3～5滴，约0.5～lmin后，滴加等量缓冲液(Ⅱ液)，摇动玻片混匀。(5)冲洗:5-10min后用流水冲去染液，待干。(6)观察结果:将干燥后的血涂片置显微镜下观察。用低倍镜观察血涂片体、尾交界处的血细胞。一张良好血涂片的要求：厚薄适宜头体尾明显细胞分布均匀边缘整齐两端和两边留有空隙标准血涂片血涂片分布不均主要原因：推片边缘不齐、用力不均匀、载片不清洁pH的影响：H＋：碱性染料亲和力下降，增强伊红着色，出现红染O

3、H－：酸性染料亲和力下降，增强美蓝着色，出现蓝染PBS缓冲液：pH6.4－6.8以维持恒定的pH环境5.注意事项①血膜要干透后才能染色，否则染色时易脱落；②染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关，一般染液淡、染色时间长些效果好；③染液不能过少，以防蒸发沉淀；④冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲，防染料沉着。冲洗时间也不能长；⑤染色过淡时可复染，复染时先将染料稀释好；⑥染色过深可用水冲洗或浸泡，还可用甲醇脱色；⑦分类最佳区域为体、尾交界处。4.影响瑞氏染色效果的一些因素：A.染料放置时间；B.溶液的酸碱度；C.染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关。