专题2-1微生物培养

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1、课题1微生物的实验室培养专题2:微生物的培养与应用微生物包括哪五类：病毒细菌放线菌真菌原生动物特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构.原核生物界原生生物界真菌界病毒界微生物基础知识细菌的外形与大小细菌：单细胞不分枝的原核微生物。细菌细胞微小而透明，通常用适当染料染色后显微镜观察图1-1常见的三种细菌典型形态A.球菌B.杆菌C.弧菌芽孢有些细菌在一定的条件（恶劣的环境）下，细胞里面形成一个椭圆形抗逆性很强的休眠体，叫做芽孢。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小

2、又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.孢子是微生物和一些植物的生殖细胞，包括无性孢子和有性孢子，是繁殖体与孢子菌落：单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落细菌的菌落特征因种而异微生物的实验室培养条件：（1）合适的营养和环境条件（2）确保其他微生物无法混入了解有关培养基的基础知识，进行无菌技术的操作，进行微生物的培养。一、课题目标：掌握培养基的制备、高压蒸气灭菌和平板划线法等基本操作技术，熟练

3、、规范地进行无菌操作，成功地培养微生物。无菌技术的操作。二、课题重点和难点：三、技能目标：一、基础知识：（一）培养基按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。（1）按物理状态来分：培养基可分为固体培养基和液体培养基。其中固体培养基用于用微生物分离、鉴定、计数和菌种保存等方面（2）按功能来分，可分为选择培养基和鉴别培养基。（3）按成分来分，可分为天然培养基和合成培养基。1.培养基的类型和用途液体培养基：表面生长均匀混浊生长沉淀生长固体培养基：菌落，菌苔选择培养基加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐

4、的培养基:分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物鉴别培养基伊红——美蓝培养基鉴别大肠杆菌2.培养基成分：思考：各种培养基的具体配方不同，但一般都包括哪些成分？水、无机盐、碳源、氮源、（生长因子）+满足微生物对pH、特殊营养物质、氧气的要求CC二.无菌技术思考：1.什么是无菌技术？包括哪些方面？2.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？（P15旁栏思考）3.消毒和灭菌有何不同？4.常用的消毒和灭菌方法有哪些？无菌技术：泛指培养微生物操作中，所有防止

5、杂菌污染的方法。无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。（１）消毒定义：利用较温和的化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程。2.消毒与灭菌的概念及两者的区别（2）灭菌的定义：以强烈的理化因素消灭所有微生物，包括所有孢子（繁殖体）、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌之过程。灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。比较消毒和灭菌（填表）比较项理化因素的作用强度消灭微生物的数量芽孢和孢子能否被消灭消毒较为温和部分生活状态的微生物不能灭菌强烈全部微生物能3.常用的消毒方法：煮沸消毒法，巴氏消毒法，紫外线或化学药剂消毒法

6、常用的灭菌方法：灼烧灭菌干热灭菌高压蒸汽灭菌：培养皿培养基100kPa121℃15-30min牛奶接种室、接种箱或超净工作台接种工具，接种环、接种针或其他金属用具玻璃器皿（吸管、培养皿）1、灼烧灭菌2、干热灭菌：160-170℃下加热1-2h。3、高压蒸气灭菌：100kPa、121℃下维持15-30min.(2)灭菌的方法：3.微生物实验室培养的基本操作程序1、器具的灭菌2、培养基的配制3、培养基的灭菌4、倒平板5、微生物接种6、恒温箱中培养7、菌种的保存【补充】培养基的配制原则：①目的要明确：根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培

7、养基的类型和配制量。②营养要协调：培养基中各种营养物质的浓度和比例要适宜。例如：碳氮比4∶1时，谷氨酸棒状杆菌大量繁殖而产生谷氨酸少；碳氮比为3∶1时，菌体繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。③pH要适宜：细菌培养基pH中性或偏碱性，霉菌培养基呈酸性。三、实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）1计算－2称量－3溶化－4灭菌－5倒平板（冷却至50℃）－6无菌检查1．计算2．称量3．溶化(调pH：pH7.0-7.2)4．灭菌:(培养皿和培养基)将培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为1

8、00kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160～170℃下灭菌2h。5.倒平板:待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）2d后观察平板，无杂