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时间:2019-06-26
《人教版教学课件以菜花为实验材料进行DNA的粗提取与鉴定》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、§5.1DNA的粗提取与鉴定实验原理1、研磨液中的变性剂可使细胞破裂,释放DNA。2、DNA不溶于酒精溶液,但细胞中某些物质则溶于酒精。利用这一原理,可进一步提取含杂质较少的DNA。3、沸水浴条件下,DNA遇二苯胺被染成蓝色。因此,二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。目的要求1、初步掌握DNA的粗提取和鉴定2、观察提取的DNA物质用具与材料1、用具体积分数为95%的预冷酒精、蒸馏水、研磨液、二苯胺试剂;搅拌机、烧杯(100mL、50mL)、纱布、试管(20mL)、玻璃棒、滴管、量筒(10mL)、镊子、漏斗、纱布、滤纸、三角架、酒精灯、
2、石棉网、试管夹、天平、冰箱等。2、材料新鲜菜花实验过程(一)课前准备将新鲜的菜花和体积分数为95%的酒精溶液放入冰箱冷冻24h以上,准备各种试剂和实验用具全班学生分组,每组7-8人为宜.(二)DNA的粗提取1.取材称取30g菜花,去梗取花,切碎。2.研磨向碎菜花中倒入10mL研磨液(课前配制好的),拌匀,倒入搅拌机充分研磨5min。3.过滤将菜花研磨液过滤到离心管中。离心2min,再取上清液倒入烧杯中。4.沉淀将一倍体积的上清液倒入两倍体积的体积分数为95%的预冷酒精溶液,并用玻璃棒缓缓、轻轻地搅拌溶液(玻璃棒不要直插到烧杯底部)
3、,沉淀3min后,可见白色的DNA絮状物出现。用玻璃棒缓缓旋转,将絮状物缠绕在玻璃棒上。(三)DNA的鉴定1、取2支20mL的试管,分别编为1号、2号,分别加入2mol/LNaCl溶液5ml2、将丝状物用玻璃棒挑起溶于2号试管中(用玻璃棒搅拌,使其充分溶解)3、各加入二苯胺试剂4ml4、混匀后,置于沸水浴中加热5min5、待冷却后,比较两只试管中溶液的颜色变化观察现象:2号试管溶液变为蓝色DNA的鉴定使细胞核内的DNA释放不完全,提取的DNA量变少,导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等为了纯化提取的DNA需要将滤液作进
4、一步处理,加冷却酒精溶液。讨论:滤液中可能含有哪些成分?答:可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质想一想:如果研磨不充分,会对实验结果产生怎样的影响?观察你提取的DNA颜色,如果不是白色丝状物,说明DNA中的杂质较多;二苯胺鉴定出现蓝色,说明实验基本成功,如果不呈现蓝色,可能所提取的DNA含量低,或是实验操作中出现错误,需要重新制备成果评价1、是否提取出了DNA本实验提取的DNA粗制品有可能仍然含有核蛋白、多糖等杂质。2、分析DNA中的杂质练习1、请解释提取DNA的实验操作中主要步骤的目的。答:提取DNA的第一步是材料的选取,其目的
5、是一定要选取DNA含量较高的生物材料,否则会由于实验过程中或多或少的损失而造成检测的困难;第二步是DNA的释放和溶解,这一步是实验成功与否的关键,要尽可能使细胞内的DNA全部溶解;第三步是DNA的纯化,即根据DNA的溶解特性、对酶及高温的耐受性的不同等特性,最大限度地将DNA与杂质分开;最后一步是对DNA进行鉴定,这是对整个实验的结果的检测。2、你认为从细胞中提取某种特定的蛋白质与提取DNA一样容易吗?答:提取蛋白质比提取DNA的难度大。这是因为,与DNA相比,蛋白质对温度、盐浓度、pH等条件要敏感得多,很容易失活;并且蛋白质的空
6、间结构多种多样,理化性质各不相同,使得蛋白质的提取没有一种统一的方法,只能根据特定蛋白质的特性摸索提取的条件,设计特定的方法。谢谢
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