长江口中华鲟幼鱼鳃氯细胞的形态结构与盐度适应性变化

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1、长江口中华鲟幼鱼鳃氯细胞的形态结构及盐度适应性变化摘要中华鲟是我国一级保护动物，其幼鱼从淡水转移到海水的渗透压调节是其今后能否适应海水生活的关键。近年来，已有学者对中华鲟渗透压调节过程中的生理变化进行了研究，但是对其鳃氯细胞的研究还有待补充。本论文从中华鲟幼鱼鳃氯细胞的定位、定量、超微结构等方面研究了其渗透压调节的机制。研究结果与结论如下：1.中华鲟幼鱼鳃氯细胞免疫荧光染色条件优化及定位研究为了研究中华鲟幼鱼鳃氯细胞的定位，运用冰冻切片的免疫荧光染色技术来分析其在鳃上的位置。为了得到较好的实验结果，首先对免疫荧光染色的实验条件进行优化。运用棋盘法测定一抗α5和二抗Alexa488驴抗鼠荧光二

2、抗的最佳稀释浓度分别为:1:1500和1:500。通过免疫荧光染色确定淡水组(FW)和盐水组(SW,盐度为20)的氯细胞均分布在鳃丝和鳃小片基部，少量分布在鳃小片上，这表明中华鲟幼鱼鳃上的氯细胞主要分布在鳃丝上。2.中华鲟幼鱼鳃氯细胞的定量研究及生化分析为了分析从淡水转移到盐度为20的情况下中华鲟幼鱼鳃氯细胞的定量，运用免疫荧光染色法对氯细胞进行分析，并且用IPP6.0对氯细胞进行定量。结果显示，淡水组（FW）鳃丝上氯细胞数量(4.72±0.34个/100μm)大于鳃小片上氯细胞数量(0.64±0.19个/100μm)，两者差异极显著（P<0.01）。盐水组(SW)鳃丝上氯细胞数量(5.08

3、±0.31个/100μm)也大于鳃小片上氯细胞数量(0.76±0.16个/100μm)，差异极显著（P<0.01）。可见在淡水组（FW）和盐水组(SW)中氯细胞均主要分布在鳃丝上，尤其是位于鳃小片基部的鳃丝上，少量分布于鳃小片上，进一步验证了上述的氯细胞的分布状况。盐水组(SW)鳃丝和鳃小片上的氯细胞数量相对于淡水组(FW)均2增加了。淡水组(FW)鳃丝和鳃小片上氯细胞的平均面积（187.28±18.30μm、22159.53±16.72μm）均小于盐水组(SW)鳃丝上氯细胞的面积（361.90±27.88μm、2275.61±14.74μm），无显著性差异（P>0.05），且这两组实验鱼鳃

4、丝上氯细胞的面积均大于鳃小片上的；淡水组（FW）和盐水组(SW)鳃丝与鳃小片上氯细胞的形状因子指数分别为0.72±0.33、0.68±0.46、0.67±0.15、0.62±0.20，无显著性差异（P>0.05）。万方数据上海海洋大学硕士学位论文可见，这两组实验鱼鳃丝和鳃小片上氯细胞的形状均呈卵圆形。同时还分析了中++华鲟幼鱼渗透压调节过程中血清渗透压、离子以及鳃上Na-K-ATPase(NKA酶)+-的变化。在高渗环境下中华鲟幼鱼的血清渗透压增加，Na和Cl浓度均增加，而+++K的浓度下降，且鳃上的Na-K-ATPase(NKA酶)活性增加，进一步证实了渗透压调节时，鳃上氯细胞通过NKA酶

5、活性的增加来调节离子平衡。3.中华鲟幼鱼鳃氯细胞的电镜结构研究为了研究中华鲟幼鱼在盐度适应过程中鳃上氯细胞结构的变化，通过扫描电镜(SEM)和透射电镜(TEM)分别分析其表面结构和内部结构的变化。结果显示，在淡水组(FW)和盐水组(SW)中氯细胞的顶膜结构有差异。淡水组(FW)氯细胞顶膜较为平滑，开口较大，且其表面具有大量微绒毛。盐水组(SW)氯细胞的顶膜凹陷形成了一个顶隐窝，开口较小。由透射电镜图可知：在淡水组(FW)和盐水组(SW)中，氯细胞最显著的特征均为细胞质中分布着大量的线粒体和致密的管网结构。在透射电镜下可观察到淡水组(FW)鳃氯细胞的顶膜表面扁平或者轻微的凹陷，具有大量微绒毛。

6、然而在盐水组(SW)中可观察到氯细胞的顶膜凹陷形成了一个顶隐窝，且线粒体数量增加，管网结构发达，管径较粗。因此，淡水组(FW)氯细胞顶膜表面积大于盐水组(SW)的。在高渗环境中，氯细胞与相邻的辅助细胞交错形成了一个多细胞复合体。氯细胞和辅助细胞在高渗环境下共用一个顶坑，其细胞间由浅的渗漏连接相联系。氯细胞的顶膜表面具有微嵴，上面分布有糖萼，可以滞留粘液细胞分泌的黏液。黏液细胞与扁平细胞相连，其内部分布着大量的黏原颗粒（mucousgranules）。本研究结果表明，中华鲟幼鱼鳃氯细胞的表面结构和内部结构随着盐度的升高而产生变化，从而调节渗透压的平衡。关键词:中华鲟，渗透压调节，氯细胞，定量，

7、超微结构II万方数据上海海洋大学硕士学位论文Themorphologicalstructureandvariationinsalinityadapatabilityofchloridecellsonthegillsofjuvenilesturgeon(Acipensersinensis)inYangtzeEstuaryABSTRACTTheChinesesturgeonisthefirstlevelofthe