中华鲟外周血细胞形态结构的显微观察

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1、中华鲟外周血细胞形态结构的显微观察　　血细胞是鱼类机体免疫的重要组成部分，对维持鱼类机体内环境的稳定有重要作用，其部分参数可反映鱼类的健康状况[1].国内外有很多关于鱼类血细胞形态结构的研究[2~9].中华鲟（Acipensersinensis）隶属鲟形目（Acipenseriformes）鲟科（Acipenseridae）鲟属（Aci-penser），主要分布在长江流域，是典型的溯河洄游鱼类。由于过度捕捞、葛洲坝等水利工程建设、江上作业和水域污染等原因，中华鲟野生种群数量急剧下降，1988年中华鲟被列为国家一级保护动物[10]

2、.　　目前有关中华鲟的研究报道主要集中在人工繁殖、行为学、生理生化等方面的研究[11~13],但是专门对中华鲟外周血细胞形态结构的研究比较少。本研究对中华鲟血细胞的显微结构进行观察，旨在为中华鲟血液学、疾病诊断的研究提供基础数据。　　1材料与方法　　　　1.1试验材料　　　　选取4尾养殖中华鲟进行血液样品采集。实验鱼健康状况良好，均为雌性，体长162~182cm,体重20.7~36.7kg.　　1.2试验方法　　　　1.2.1采血方法用帆布担架捞取实验鱼后，腹部朝上，鳃部供水。擦去臀鳍后的水分，用5mL一次性注射器自尾鳍基部下方

3、的尾静脉抽取静脉血2mL,迅速将血液注入附有EDTA-K2的抗凝管中，颠倒180度5~8次混匀后，放入4℃冷藏箱中，带回实验室待测。　　1.2.2红细胞密度统计按林浩然[14]的方法进行。　　1.2.3白细胞分类计数和各类血细胞大小测量抗凝血在干净载玻片上涂片，晾干，用瑞氏-吉姆萨染液联合染色。在Leica显微镜油镜下进行血细胞观察、测量细胞大小，用南京倍宁医学病理成像系统进行观察、拍照。每尾实验鱼制作2张血涂片，每张涂片上计数200个白细胞，对1600个白细胞进行分类计数。在测量细胞大小时，除数量极少的嗜酸性粒细胞外，其余各种

4、血细胞大小取50次测量平均值。　　1.3数据处理　　　　实验数据用Excel软件进行处理，结果均以平均值±标准差（Mean±SD）表示；照片用Photo-shop7.0进行处理，同比例缩放图像和标尺。　　2结果与分析　　　　2.1中华鲟外周血细胞的显微形态结构　　　　通过显微镜观察发现，中华鲟血涂片中红细胞的数量最多，白细胞数量较少且单个或少数几个聚集分散在红细胞之间。白细胞包括淋巴细胞、血栓细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞，未观察到嗜碱性粒细胞。　　2.1.1红细胞（erythrocyte

5、）红细胞呈椭圆或卵圆形，表面光滑；细胞核形状与细胞形状相似，位于细胞中央，少数略偏位，细胞质丰富。细胞核内染色质疏松，被染成紫红色，无核仁，细胞质被染成粉红色。部分血涂片染色过程中环境偏碱性，细胞呈灰蓝色。此外，还观察到红细胞裂解后形成的核影,被染成粉红色（图1（a））。　　2.1.2淋巴细胞（lymphocyte）淋巴细胞呈圆形、椭圆形或不规则形，占据多半细胞空间。细胞质较少，有的呈一薄层包裹细胞核，有的向外伸出形成明显的伪足突起（图1（b）），有的不可见，细胞近似裸核（图1（b））。细胞核内染色质致密呈块状，被染成深紫色，细

6、胞质被染成浅蓝色。　　2.1.3血栓细胞（thrombocyte）血栓细胞呈长杆形（图1（c）、（d）、（e））、圆形（图1（c））或椭圆形，表面光滑。细胞核呈长杆形、椭圆形或肾形等，位于细胞中央，少数偏位，细胞质较少，仅一薄层包裹细胞核；细胞核内染色质致密，被染成紫红色，细胞质染色较淡，呈粉红色，血栓细胞在血涂片中常见到单个或数个聚集在一起出现（图1（d））。　　2.1.4单核细胞（monocyte）单核细胞呈椭圆形、圆形或不规则形。细胞核形状多种多样，包括圆形、椭圆形、肾形或马蹄形等，常偏于细胞一侧，细胞质较丰富；细胞核内染

7、色质疏松，被染成紫红色，无核仁，细胞质被染成灰蓝色，染色不均匀且含有空泡（图1（e）、（f））。在显微镜下，单核细胞和淋巴细胞有时难以区分，前者染色质疏松不匀，细胞质染色灰蓝色，朦胧模糊，而后者染色质致密呈块，染色质浅蓝色，清晰透明（图1（f））。　　2.1.5嗜中性粒细胞（neutrophil）嗜中性粒细胞呈圆形、卵圆形（图1（g））或不规则形（图1（h））等，细胞核为肾形、马蹄形或分叶形等，常偏于细胞一侧与细胞膜相切，细胞质丰富。细胞核内染色质疏松，被染成紫红色，无核仁，细胞质染色较浅，呈淡粉红色，有的甚至是无色。　　2.1

8、.6嗜酸性粒细胞（eosinophil）嗜酸性粒细胞呈圆形或卵圆形，细胞核为肾形或分叶形等，常偏于细胞一侧，细胞质丰富。细胞核内染色质致密，被染成紫红色，细胞质中充满了均匀饱满的嗜酸性颗粒，被染成橘红色。在血涂片中偶尔见到，数量极少。2.2白细胞分类计数和各类血