盐度胁迫下尼罗罗非鱼鳃离子细胞和na+-k+-atpasea1的渗透调节

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时间:2019-03-05

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1、学校代码:10264研究生学号:M100107291上海海洋大学硕士学位论文题目:盐度胁迫下尼罗罗非鱼鳃离子细胞和++Na-K-ATPasea1的渗透调节英文题目:Osmoregulationofionocytesand++Na-K-ATPasea1ingillofO.niloticusundersalinitiesstress专业:动物遗传育种与繁殖研究领域:水产动物遗传育种姓名:庄青青指导教师:赵金良教授二O一三年三月二十七日1上海海洋大学硕士学位论文上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明:我恪守学术道德,崇尚严谨学风。所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的

2、成果。除文中已经明确注明和引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写,我对所写的内容负责,并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名:日期:年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□,在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名:指导教师

3、签名:日期:年月日日期:年月日2上海海洋大学硕士学位论文上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注来琦芳中国水科院东海水产研究所研究员主席崔映宇同济大学副教授委员王成辉上海海洋大学教授委员赵金良上海海洋大学教授委员唐首杰上海海洋大学讲师秘书地点水产与生命学院C217时间2013.05.273++盐度胁迫下尼罗罗非鱼鳃离子细胞和Na-K-ATPasea1的渗透调节摘要鳃是鱼类进行离子交换的主要渗透调节器官,鳃上皮中含有的大量离子细胞(也称线粒体丰富细胞、氯细胞)是离子分泌和吸收的主要场所。离子细胞膜上的+++++Na-K-ATP酶(Na-K-ATPase,NKA)也称为Na

4、泵,是一种普遍存在的跨膜蛋+白,是离子转运的关键酶之一,可通过水解一分子ATP主动地将3Na运出膜外+和将2K运进膜内。NKA通过提供其他离子运输系统的动力来维持跨膜稳态。尼罗罗非鱼(Oreochromisniloticus)为广盐性养殖鱼类,本研究通过开展尼罗罗非鱼从淡水转入到不同盐度的咸水环境中胁迫实验,分析生化水平(NKA酶活)、分子水平(NKA转录水平)、生理水平(血清渗透压和离子)和细胞水平(鳃离子细胞类型、数目、位置)变化情况,系统阐述尼罗罗非鱼鳃离子细胞和++Na-K-ATPase应对环境盐度变化的渗透调节,为开展半咸水养殖鱼类品种驯化和选育工作提供基础资料和依据。本研究首先利

5、用扫描电镜和免疫组化技术,研究了尼罗罗非鱼鳃中离子细胞的分布,及其不同盐度(0、10、20、30)胁迫对离子细胞数目和形态变化的影响。扫描电镜结果表明,离子细胞分布在鳃丝的鳃小片基部,根据其表面开口长度,可分为Ⅰ型(>6.5μm)、Ⅱ型(3.2~6.5μm)和Ⅲ型(<3.2μm)3种亚型;不同盐度下离子细胞总数目变化趋势为:盐度10<盐度20<盐度0<盐度30;从盐度0转移到盐度10后,离子细胞总数目减少,Ⅰ型离子细胞数目显著下降;盐度20中的离子细胞数量高于盐度10,但不显著;盐度30中的离子细胞总数随Ⅲ型离子细胞数量的提高而显著增加。免疫组织化学进一步证实了不同盐度条++件下Na-K-A

6、TPase免疫反应阳性细胞均分布在鳃丝的鳃小片基部。扫描电镜和免疫组化技术结果表明,尼罗罗非鱼可通过改变鳃离子细胞数量和形态结构来适应环境中的盐度变化,推测Ⅰ型和Ⅲ型离子细胞分别在低盐、高盐适应中起着重要作用。为进一步揭示尼罗罗非鱼鳃的渗透调节机理,分别设置了两种不同的盐度胁I上海海洋大学硕士学位论文迫实验,实验组A(盐度0→7.5→15→20→25)和实验组B(盐度+-+0→7.5→15→7.5→0),检测其血清渗透压、血清离子(Na、Cl、K)浓度与盐++度变化关系,以及鳃Na-K-ATPase(NKA)酶活活性与NKAa1mRNA表达水平变化与盐度变化关系。结果表明,实验组A中,血清渗

7、透压水平随环境盐度+-的增加显著增加,呈正相关关系;血清Na、Cl浓度随着盐度增加而升高,血清+K浓度先随着盐度(7.5,15)上升显著,但在20和25盐度中显著下降;鳃NKA酶活活性及NKAa1mRNA表达水平也随着盐度的增加呈上升趋势。实验组B+-+中,从0盐度转移至15盐度中,血清渗透压、血清Na、Cl、K浓度、NKAa1mRNA表达水平及酶活力均呈现出显著上升趋势;从15盐度转移至0盐度时,各指标均呈

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