叶酸受体靶向磁共振2f荧光多功能脂质体的分析

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1、华中科技大学硕士学位论文镜观察。KB细胞与含叶酸配体的脂质体共培养后可以观察到明亮的绿色荧光，而没有偶联叶酸配体的脂质体几乎没有荧光。当在F-Gd-Calcein-L中加入游离叶酸后，可以看到细胞内的绿色荧光明显减弱。而且，从荧光照片上可以看到细胞的荧光主要集中在细胞膜上，由于叶酸受体是一种膜糖蛋白，而脂质体进入细胞是经过叶酸受体介导的内吞作用，所以细胞的荧光集中在膜上。3.1.3流式细胞术考察KB细胞、Hela细胞、A549细胞对含Gd、含Calcein磁共振/荧光脂质体的摄取将叶酸受体表达阳性的KB细胞与Calcei

2、n终浓度为12.5μM或5.8μM的Gd-Calcein-L、F-Gd-Calcein-L及F-Gd-Calcein-L+FA共培养1h后洗去药液（用了两种方法：六孔板法和Ep管法），于流式细胞仪上检测。F-Gd-Calcein-L组的平均荧光强度是Gd-Calcein-L组的几十甚至上百倍，是加游离叶酸干预组的10-31倍。将叶酸受体表达阳性的Hela细胞与Calcein终浓度为12.5μM的Gd-Calcein-L、F-Gd-Calcein-L及F-Gd-Calcein-L+FA共培养1h后洗去药液，于流式细胞仪上检

3、测。F-Gd-Calcein-L组的平均荧光强度是Gd-Calcein-L组的33倍，是加游离叶酸干预组的17倍。将叶酸受体表达阴性的A549细胞与Calcein终浓度为5.8μM的Gd-Calcein-L、F-Gd-Calcein-L及F-Gd-Calcein-L+FA共培养1h后洗去药液，于流式细胞仪上检测。F-Gd-Calcein-L组的平均荧光强度和Gd-Calcein-L组，加游离叶酸干预组的平均荧光强度基本一致，没有特异性的摄取作用。以上荧光实验可以看出：叶酸靶向的脂质体可以与叶酸受体表达阳性的KB细胞、He

4、la细胞特异性作用，并且这种作用可以被游离叶酸竞争性拮抗。对叶酸受体低表达的A549细胞，叶酸靶向的脂质体没有特异的作用。3.2磁共振成像法考察细胞对脂质体的摄取3.2.1磁共振成像定性考察Hela细胞对含Gd、不含Calcein的磁共振脂质体的摄取将叶酸受体表达阳性的Hela细胞与Gd-L、F-Gd-L及F-Gd-L+FA共培养2.5h后洗去药液，于3.0T磁共振成像仪上检测。F-Gd-L组的磁共振成像信号比Gd-L3华中科技大学硕士学位论文组强，且加游离叶酸干预后，信号减弱。3.2.2磁共振成像定性考察Hela细胞、

5、KB细胞对含Gd、含Calcein的磁共振/荧光脂质体的摄取将叶酸受体表达阳性的Hela细胞与空白脂质体、Gd-Calcein-L、F-Gd-Calcein-L、F-Gd-Calcein-L+FA、Gd-DTPA共培养1h后洗去药液，于3.0T磁共振成像仪上检测。F-Gd-Calcein-L组的磁共振成像信号比Gd-Calcein-L组强，且加游离叶酸干预后，信号减弱。而且细胞孵育后，F-Gd-Calcein-L比Gd-DTPA磁共振信号强。说明脂质体包裹的Gd造影剂释放缓慢、滞留时间延长。将叶酸受体表达阳性的KB细胞与

6、Gd-Calcein-L、F-Gd-Calcein-L及F-Gd-Calcein-L+FA共培养1h后洗去药液，于3.0T磁共振成像仪上检测。F-Gd-Calcein-L组的磁共振成像信号比Gd-Calcein-L组强，且加游离叶酸干预后，信号减弱。磁共振成像实验同样可以说明：叶酸靶向的脂质体可以与叶酸受体表达阳性的KB细胞、Hela细胞特异性作用，并且这种作用可以被游离叶酸竞争性拮抗。叶酸靶向的脂质体粒径较小，稳定性好。包裹水溶性荧光染料Calcein，不影响其最大发射波长；包裹磁共振造影剂Gd-DTPA-bis(SA

7、)，脂质体磁共振成像清晰。插入叶酸配体后，脂质体能靶向到叶酸受体表达阳性的细胞，并且这种作用可以被游离叶酸阻断，但是对于叶酸受体表达阴性的细胞，这种特异性作用并不存在。因此该脂质体可以作为模型药物，为进一步探索肿瘤靶向的磁共振/荧光多功能探针作铺垫。关键词：叶酸；脂质体；荧光；磁共振成像4华中科技大学硕士学位论文AbstractFR(folatereceptor),whichisawell-knowntumorassociatedantigen,exhibitslimitedexpressioninnormaltissu

8、es,butisgreatlyover-expressedinavarietyofcarcinomas.DuetoitshighbindingaffinityforcellsurfaceFR,folateconjugationallowsdeliveryofnon-specificdrugsselectivelyin