NMDA受体亚单位在成年大鼠脑SVZ区神经干细胞上超微分布的分析

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时间:2019-06-25

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1、目的脑室下区(SvZ)是成年脑内重要的神经发生区,NMDA受体是中枢神经系统主要的兴奋性氨基酸受体。NMDA受体在SVZ区细胞的超微分布未见报道,鉴于此,本实验研究NMDA受体亚单位NRl、NR2A、NR2B在成年大鼠SVZ区神经干细胞上的超微分布。方法取健康雄性成年SD大鼠,灌注固定,取脑,用同一固定液后固定,做50I.tm振动切片,梯度蔗糖浸泡,液氮冻融处理后,室温下兔血清封闭,应用包埋前免疫电镜双技术,nestin免疫酶组织化学技术显示神经干细胞,免疫金.银标记法显示NRl、NR2A、NR2B,之后取SVZ区免疫反应阳

2、性部位的组织,经系列脱水,置换,Epon812树脂浸润,包埋,聚合,修块,做50nm超薄切片,经醋酸铀、枸橼酸铅双重染色,透射电镜观察、拍照、图像分析。结果1.Nestin免疫反应阳性产物是黑色嗜锇电子致密物,呈絮状分布在成年大鼠SVZ区成神经细胞(A型细胞)、星形胶质细胞(B型细胞)、神经前体细胞(C型细胞)和室管膜上皮细胞(E型细胞)的胞浆内。2.NRl、NR2A、NR2B免疫反应阳性产物呈黑色颗粒状,分布在成年大鼠脑SVZ区上述各型细胞以及毗邻纹状体中神经元的胞膜上和胞浆内,且在胞浆内的高尔基复合体、粗面内质网上可见金

3、颗粒标记。3.双标实验中,成年大鼠脑SVZ区上述四型细胞的胞浆内均可见有NRl、NR2A、NR2B免疫金颗粒与nestin免疫反应阳性产物的共表达。阴性对照朱见任何标记。结论NMDA受体亚单位NRl、NR2A、NR2B在成年大鼠脑SVZ区A型、.3.徐州医学院硕士学位论文B型、C型和室管膜上皮细胞的胞膜和胞浆内以及高尔基复合体、粗面内质网均有表达,且与nostin免疫反应阳性产物在胞浆内共存。关键词NMDA受体亚单位;脑室下区;神经干细胞;包埋前免疫电镜双标技术;超微结构●’徐州医学院硕士学位论文Subcellulardis

4、tributionofNMDAreceptorsubunitintheNSCswithintheSVZoftheadultratsAbstractobjectiveTheadultmammaliansubventricularzone(svz)isanimportantgerminallayer.N—methyl—D—aspartatereceptors(NMDARs)areexcitatoryglutamatereceptorswidelyexpressedinthecentralnervoussystemthatplay

5、keyroles.ThereisnoreportonSubcellulardistributionofNMDAreceptorsubunitinthecellswithintheSVZ.SowestudythesubcellulardistributionoftheNMDAreceptorsubunitsintheneuralstemcellswithinthenormaladultratsubventricularzone.MethodsTookhealthymaleadultSprague—Dawleyrats,foll

6、owedperfusion—fixation,removedbrains,followedbythesamefixativesolution,then50um—thicksectionswerecutwiththevibratingmicrotom,Tissuesectionsweresoakedinthegradedseriesofsucrosesolutions,thawedbyliquidnitrogenandblockedinthe1O%rabbitserum.Neuralstemcellswereshowedbye

7、nzymelabelingandNRl,NR2A,NR2Bwererevealedbyimmunogold—silverlabeling.Withthepre-embeddingimmunoelectonmicroscopytechnique,samplesweresaturatedandembededinEpon812resin,thenpolymerized,afterseriesofdehydrationandsubstitution.50nm—thickultra-thinsectionswerecut,double

8、stainedwithuranylacetateandleadcitrate,andexaminedunderthetransmissionelectronmicroscope,andthenimageanalysiswasdidafterthepicturesweretaken.Resu

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